开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 课题背景
茶多酚（Tea Polyphenols），又名抗氧灵、维多酚、防哈灵，是茶叶中所含的一类多羟基类化合物，简称TP，主要化学成分为儿茶素类（黄烷醇类）、黄酮及黄酮醇类、花青素类、酚酸及缩酚酸类、聚合酚类等化合物的复合体。其中儿茶素类化合物为茶多酚的主体成分，占茶多酚总量的65%~80%。茶多酚也是一种广谱高效低毒的抗菌药，对金黄色葡萄球菌和普通变形杆菌尤其是对肠道致病菌具有不同程度的抑制和杀伤作用，还具有防癌，抗癌，预防心血管疾病，抗氧化，防辐射等多种生物活性。
金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），是革兰氏阳性菌的代表，有“嗜肉菌'的别称。可引起许多严重感染，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因此，食品受到污染的机会很多。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物、青霉素、红霉素、土霉素、新霉素等抗生素敏感，但易产生耐药性。对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制生长。
金黄色葡萄球菌生物膜的形成过程大致可分为4个阶段:黏附、聚集、成熟和脱落。细菌生物膜的形成过程是多个调控网络共同作用的结果。金黄色葡萄球菌调控生物膜的分子机制主要涉及密度信号感应系统和全局性调控因子, 目前研究的较为清楚的是附属基因调节系统Agr和辅助调节子SarA。
群体感应 (Quorum-sensing) 是金黄色葡萄球菌监测菌群数量和密度并感知周围环境的重要机制, 细菌通过群体感应改变特定基因的表达水平, 从而调控细菌行为。附属基因调节系统Agr(Accessory gene regulator) 是目前研究最为广泛且清楚的群体感应系统, 在细菌定植、侵袭、生物膜形成及播散等方面具有重要意义。Agr系统通过2个类似双元件的蛋白 (AgrC和AgrA) 以及2个反应生物膜结构与成熟度的蛋白 (AgrD和AgrB) 共同调节下游基因表达水平。金黄色葡萄球菌还存在另一种生物膜全局调节因子SarA (Staphylococcal accessory regulator A) , 对生物膜具有正向调控作用，是一个潜在的治疗生物膜相关感染的靶点。
金黄色葡萄球菌生物膜的形成过程是一个复杂过程, 涉及了多种蛋白、多糖和核酸分子, 同时受到各种调控网络的共同作用, 使细菌适应各种复杂环境并在游离播散与局部定植状态之间不断变换循环, 扩大了感染范围。深入研究生物膜形成与调控的分子机制对寻找特异性干预靶点具有重要意义, 有助于临床预防和治疗金黄色葡萄球菌生物膜相关感染。
茶多酚能够与细菌细胞膜结合并导致细菌细胞膜的损失,从而产生直接的抗菌作用。细菌细胞膜的通透性增加, 导致其内容物金属离子和蛋白质的外泄,从而使细菌代谢发生紊乱。研究显示茶多酚对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌均有抑菌活性,且对金黄色葡萄球菌的抑菌作用更强。
- 要解决的问题
- 茶多酚对金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度（MIC）的测定
- 对金黄色葡萄球菌生物膜定量抑制作用
- 对金黄色葡萄球菌成熟生物膜的破坏作用
- 对金黄色葡萄球菌胞外多糖产生的影响
- 与苯甲酸钠协同对生物膜形成的抑制作用
- 茶多酚在高盐条件下对生物膜形成的抑制作用
- 茶多酚在不同pH条件下对生物膜形成的抑制作用
- 研究方法和内容
- 菌种的活化
从超低温冰箱中取出菌种，37℃下解冻，接种于LB培养基，经过两次过夜活化
2、茶多酚对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度（MIC）的测定
将茶多酚溶于LB培养基，制成100mg/mL溶液。将活化后菌种，按2%接种量接种于灭菌过的新鲜LB培养基，37℃恒温，150rpm振荡培养至菌液OD600nm达到0.4，振荡培养，加入100mg/mL茶多酚溶液，按下表1浓度梯度，移取相应溶液至相应试管中：
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