西兰花类胡萝卜素提取物的抗氧化活性研究文献综述

课题来源

自拟课题

课题性质

基础研究

课题名称

西兰花类胡萝卜素提取物的抗氧化活性研究

毕业设计的内容和意义

类胡萝卜素（carotenoid）：一类重要的天然色素的总称，属于化合物。普遍存在于动物、高等植物、真菌、藻类和细菌中的黄色、橙红色或红色的色素，主要是beta;-胡萝卜素和gamma;-胡萝卜素，因此而得名。不溶于水，溶于脂肪和脂肪溶剂。亦称脂色素。自从19世纪初分离出胡萝卜素，至今已经发现近450种天然的类胡萝卜素；利用新的分离分析技术如薄层层析、高压液相层析以及质谱分析还不断发现新的类胡萝卜素。植物的类胡萝卜素存在于各种黄色质体或有色质体内；如秋季的黄叶，黄色花卉，黄色和红色的果实和黄色块根。动物的类胡萝卜素主要是脂肪、卵黄、羽毛和鱼鳞以及虾蟹的甲壳的色素。动物的类胡萝卜素一般与蛋白质结合在一起，如虾青蛋白含有虾青素，虾卵绿蛋白是虾青素与一种富含的复合物。beta;-胡萝卜素是哺乳动物合成维生素A的前体，称为维生素A原。叶绿体内除含有叶绿素外也含有类胡萝卜素，类胡萝卜素能将吸收的光能传递给叶绿素a，是光合作用不可少的光合色素.其中叶黄素是一种重要的抗氧化剂，为类胡萝卜素家族（一组植物中发现的天然的脂溶性色素）的一员，在自然界中与玉米黄素共同存在。

西兰花营养丰富，含蛋白质、糖、脂肪、维生素和胡萝卜素，营养成份位居同类蔬菜之首，被誉为“超级食物”。多项研究已发现，经常吃西兰花有助于降低 前列腺癌、结肠癌、乳腺癌、肺癌和皮肤癌的发病危险。

本课题要求对南京市售西兰花类胡萝卜素提取物进行体外抗氧化活性的初步研究。

文献综述

类胡萝卜素有多种生物学作用,包括抑癌防衰、减低一些疾病发生.其重要原因之一是它们的生物抗氧化剂特性:猝灭1O2、清除自由基、抑制脂类过氧化与细胞呼吸爆发的抗氧化作用.采用H2O2-NaOCl体系产生的1O2的发光法研究1O2的猝灭作用,脉冲辐解法研究与CCl3OO@ 的反应,测定自由基引发的亚油酸甲酯氢过氧化物生成和脂质体过氧化产物硫代巴比妥酸反应物生成研究抑制脂质过氧化,通过依赖于鲁米诺的化学发光法与无细胞模拟体系研究对巨噬细胞呼吸爆发的影响.研究表明:类胡萝卜素通过物理过程猝灭1O2,与CCl3OO@发生反应生成加合物与自由基正离子,可抑制自由基引发的脂质过氧化,可清除巨噬细胞呼吸爆发所释放的活性氧自由基,降低细胞依赖于鲁米诺的化学发光,保护宿主细胞与组织,增强细胞免疫反应活性。

类胡萝卜素在发挥抗氧化作用的同时,在一定的条件下这种抗氧化作用可能丧失,甚至表现为促氧化作用。

国内外对类胡萝卜素的抗氧化性研究进展表明类胡萝卜素的抗氧化性主要体现在其能够清除活性氧自由基。类胡萝卜素可猝灭单线态氧，清除自由基，组织脂质过氧化，保护机体免受伤害。因此本实验拟从西兰花类胡萝卜素提取物对羟基自由基，氧自由基，以及DPPH自由基的清除能力来研究其抗氧化活性。

参考文献：

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研究内容

1.西兰花粉制备

将新鲜西兰花切碎，放入鼓风干燥箱45°干燥5h。将干燥后的西兰花放入粉碎机汇总，粉碎三次，每次一分钟，得到西兰花粉末。

2.类胡萝卜提取

有机溶剂浸提法：准确称取5克西兰花粉末，加入配置好的石油醚/丙酮混合 液（2:1）100ml，在45°水浴下回流提取2h，提取三次后合并提取液。将提取液在35°下用旋转蒸发仪减压蒸馏干燥，用正己烷复溶，加入等体积10%KOH醇溶液，在暗室中皂化20小时后提取出类胡萝卜素。

3.类胡萝卜素含量计算

采用分光光度法：在480nm下测定色素的吸光度，总胡萝卜素含量( mg) = 光密度值 times; 总体积( ml) times; 稀释倍数 times; 10 /2500，其中 2500 为类胡萝卜素平均摩尔消光系数。

4.抗氧化性测定

4.1氧自由基清除能力：反应体系中依次加入样品溶液 1ml，浓度为 6 mmol/L 的 Fe SO₄溶液 2ml，浓度为 6 mmol/L 的 H₂O₂ 溶液 2 ml，将反应体系混合均匀放置 10 min，再加入浓度为 6 mmol/L的水杨酸钠溶液 2 ml，静置 30 min 后于 510 nm波长下用蒸馏水调零，并测定吸光值 A₁；将上述体系中的水杨酸钠溶液用相同体积的蒸馏水代替，其他操作相同，测定吸光值 A₂；将上述体系中的样品溶液用相同体积的蒸馏水代替，其他操作相同，测定吸光值 A₀

·OH 清除率(％)=[1-( A1- A2)/A0]times;100

4.2·O₂^—清除能力：反应体系中依次加人浓度为 50mmol/L 的 Tris-HC1 溶液 5.7ml，样品溶液 0.2ml，浓度为 6 mmol/L 的邻苯三酚溶液0.1ml，将混合物反应 4min，滴入 2 滴 HC1 终止反应，在 320nm 波长下测定吸光值 A₁；将邻苯三酚用等体积的蒸馏水代替，其他操作相同，测定吸光值 A₂；将样品溶液用等体积的蒸馏水代替，其他操作相同，测定吸光值A₀

·O₂^- 清除率(%)=[1-(A1- A2)/ A0]times;100

4.3DPPH·清除能力：配制 0.2mmol/L 的DPPH 乙醇溶液，放在棕色试剂瓶中于 4℃保存，在试管中加入 2 ml DPPH 乙醇溶液及 2 ml 样品溶液，混合均匀在室温避光放置 30 min，于 517 nm波长下用无水乙醇调零，并测定吸光 值 A₁；将 DPPH 乙醇溶液用等体积的无水乙醇代替，其他操作相同，测定吸光值 A₂；将样品溶液用等体积无水乙醇溶液代替，其他操作相同，测定吸光值A₀

。DPPH·清除率(％)=[1-( A1-A2)/ A0]times;100

5.结果与讨论

研究计划

2月27日-3月12日：查阅文献，确定实验方案。

3月13日-3月17日：实验前期准备，实验所需仪器，试剂，实验计划

3月17日-4月20日：根据实验内容，分阶段进行实验，记录实验所得数据

4月21号-：整理实验数据，撰写毕业论文，准备毕业答辩。

特色与创新

本实验在后续阶段还将研究西兰花类胡萝卜素提取物与Vc，Ve的协同抗氧化作用。Vc等作为生活中易于获取的营养物质如果与类胡萝卜素有协同抗氧化作用，那么人们能够更加有效简便的保护身体机能。