中药制剂洁肤净微生物限度检查方法设计与验证文献综述

 2022-12-07 04:12
{title}{title}

开题报告内容：

【研究内容】

本次课题旨在依据2015年版《中国药典》微生物限度检查方法适用性检查的相关内容对中药制剂洁肤净微生物限度检查方法进行设计与验证，建立适合于洁肤净的微生物限度检查方法；提高该医院制剂的质量标准，为监管部门依法检验提供依据。研究内容主要包括供试品的处理、培养基的选择和配制、供试液浓度的选择、抑菌性消除的方法及进行微生物限度检查方法验证的注意事项等，其中最为关键的是研究消除中药制剂抑菌性的方法。验证试验中试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.5-2范围内，若符合则说明在此检测条件下，供试品无抑菌作用或抑菌作用可忽略不计，可按该供试液的制备方法和菌落计数的方法进行样品的微生物限度检查。

【实验方法】

对洁肤净进行微生物限度检查方法验证，初步的研究方案为先采用常规检查法对其进行微生物限度的检查，统计验证菌株的回收率。此外，由于制剂中还有冰片等有抑菌活性成分，若需要则采用薄膜过滤法消除抑菌物质的影响，再进行回收率的测定。

【文献综述】

单独附在表格后

学生签名： 王倩宇 2016 年 3 月 25 日

文献综述

【摘 要】中药制剂洁肤净的成分介绍及作用原理；介绍两种常用的微生物限度检查的验证方法；简述具有抗菌活性的中药制剂微生物限度检查法的研究进展；指出现在微生物限度检查中存在的问题，同时提出一些建议。

【关键词】洁肤净；微生物限度方法验证；薄膜过滤法

洁肤净

成分简介

洁肤净为苏州市中医医院自制制剂，主要成分为薄荷脑、冰片、乙醇等，用于季节性皮炎的治疗。其中主要成分薄荷脑，为唇形科植物薄荷的新鲜茎和叶经水蒸气蒸馏、冷冻、重结晶得到的一种饱和的环状酵，是无色针状或棱柱状结晶或白色结晶性粉末;有薄荷的特殊香气，味辛，性凉。有疏散风热，清利头目，利咽，透疹，疏肝行气的功效。用于风热感冒，风温初起，头痛，目赤，喉痹，口疮，风疹，麻疹，胸胁胀闷[[1]]。

冰片为天然右旋龙脑，它是一种名贵的中药材和辛香料,由樟科植物樟的新鲜枝、叶经提取加工制成，为白色结晶性粉末或片状结晶。气清香，味辛、凉。具有开窍醒神，清热止痛的功效。用于热病神昏、惊厥，中风痰厥，气郁暴厥，中恶昏迷，胸痹心痛，目赤，口疮，咽喉肿痛，耳道流脓[1]。许多中成药将冰片作为主要药物成分之一，如冰硼散、牛黄解毒丸等。《本草衍义》记录作用特点为“独行则势弱,佐使则有功”。《新修本草》记载其能:“主心腹邪气,风湿积聚,耳聋,明目,去目赤肤翳”。故需要对以薄荷脑和冰片为主要成分的洁肤净进行微生物限度检查及方法学的初探。

作用原理

冰片主要含有天然右旋龙脑,同时含有beta;2榄香烯、石竹烯等倍半萜及齐墩果酸、麦珠子酸、积雪草酸、龙脑香醇酮、古柯二醇、龙脑香二醇酮等三萜化合物。抗菌机理是通过使细菌细胞壁肽聚糖层增厚，产生空泡,药物可以透过细胞壁作用于菌体细胞膜上,改变细胞膜的通透性,使药物进入细胞内进而作用于线粒体膜上,使线粒体受到损伤,从而达到抗菌的目的[2][]。现代医学研究表明冰片有抗炎镇痛[[2]-][[3]]、抗菌、抗病毒[2]、保护心脑[[4]-][[5]]、双向调节神经系统[[6]]、提高其他药物生物利用度等作用[[7]-][[8]]，此外，研究表明冰片在对肿瘤的治疗中也可能起到一定作用[[9]]。

薄荷中含有黄酮类物质如薄荷异黄酮甙、异瑞福灵等；有机酸如迷迭香酸、咖啡酸等；氨基酸如甘氨酸、缬氨酸、天冬氨酸、蛋氨酸等，此外从薄荷叶中分得以二羟基-1-2-二氢萘二羧酸为母核的具抗炎作用的的多种成分。研究表明，少量薄荷可通过兴奋中枢神经,使皮肤毛细血管扩张,促进汗腺分泌,增加散热,有发汗解热的作用；在消化系统中有利胆的作用；在生殖系统中有抗早孕和抗着床的作用；在呼吸系统中导致气管产生新的分泌,使稠厚的粘液易于排出,故有祛痰作用[[10]]。同时薄荷具有抗炎镇痛和抗病原体的作用[[11]]。此洗剂主要成分冰片和薄荷脑都具有良好的抗炎作用，在治疗季节性皮炎的过程中与西药激素类药物相比有不良反应和副作用轻微的优点，值得深入研究和推广。

常用的验证方法[1]

平皿法

根据菌数报告原则取相应稀释级的供试液1ml，置直径90mm的无菌培养皿，注入15~20ml温度不超过45℃的溶化的胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每稀释级每种培养基至少制备2个平板。

1试验组 取5支无菌的空试管，各加入9.9ml1:10供试液后，分别加入相应稀释级的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌悬液0.1ml，使最终菌浓度每1ml不超过100cfu。将试管内的液体混匀后取1ml接种至平皿，同法平行制备2个平皿，随后倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，待培养基干后，倒置于32℃培养箱培养3天，计数并记录结果。

2菌液对照组 另取5支无菌的空试管，各加入9.9ml无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，再分别依次加入相应稀释级的上述菌液0.1ml，使最终菌浓度每1ml不超过100cfu。每个菌液组的液体混匀后取1ml接种至平皿，同法平行制备2个平皿，倒入胰酪大豆胨琼脂培养基，培养条件和试验组相同。

3供试品对照组 取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。

薄膜过滤法

薄膜过滤法是利用微孔滤膜阻截细菌，目的是将样品中的可溶性成分过滤，从而使污染样品的微生物得以检出的一种实验方法。薄膜过滤采用的滤膜孔径不大于0.45mu;m，一般直径为50mm，如果采用其他直径的滤膜，需要对冲洗量进行相应的调整。供试液及其溶剂应不影响滤膜材质对微生物的截留。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法进行灭菌，使用时必须保证滤膜在使用前后的完整性。不同类型的供试液需要通过适宜的方法湿润或者干燥。为了滤膜最大过滤效率的发挥，应使整个滤膜表面被供试液及冲洗液覆盖。滤膜过滤供试液后，如果需要用冲洗液冲洗，每张滤膜的冲洗量为每次100ml，总冲洗量不得超过1000ml，以免滤膜上的微生物受到损伤。

1 试验组 先用少量pH7.0冲洗液润湿滤膜，取适量供试液加至适量的稀释液中，加入适量菌液（加菌量为不大于100cfu），混匀，过滤，用适量的冲洗液冲洗滤膜，转移滤膜面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，培养3天后计数。

2 菌液对照组 先用少量pH7.0冲洗液润湿滤膜，取适量菌液（加菌量为不大于100cfu）加至稀释液中，混匀，过滤，用适量的冲洗液冲洗滤膜，培养条件和试验组相同。

3 供试品对照组 除不加试验菌外，其余操作与试验组相同。

具有抗菌活性的中药制剂微生物限度检查法研究进展

某些中药制剂的微生物限度检查法已经建立，而对于新的中成药或者没有确定微生物限度检查法的中成药，因为可能具有抑菌或抗菌作用，必须经过验证试验才能确定这些中成药的微生物限度检查法。对于具有抑菌作用的中药制剂，由于抑菌活性的干扰，采用常规法检验时，往往造成漏检或检查的结果有差异，为此进行药品检验前必须采用适当的方法消除供试品中药品成分对微生物的抗菌或抑菌作用，如培养基稀释法、薄膜过滤法。消除供试液抑菌活性后，再根据《中国药典》规定的方法进行检查[[12]]。中药制剂一般为含有多种成分的复合制剂，具有抑菌成分的中药制剂的抑菌作用的强弱可能不同，消除抑菌活性所采用的方法也不尽相同。因此，各个药品生产企业和研究单位应该根据中药制剂自身的特点，在进行药品微生物限度检查时，选择可行的、有效的且操作简便、快速的方法。洁肤净的主要成分为薄荷脑与冰片，具有抑菌活性，在进行微生物限度检查时，应采用合适的方法消除或抑制活性。

存在问题

缺乏权威统一的验证方法

中药产地分散，类同品、代用品不断，同时因生长环境、采收期、加工炮制方法不同及制剂生产工艺不同等因素，造成不同厂家生产的同一品种中药产品及同一厂家不同生产批次产品间，其内在质量即其所含化学成分及临床疗效存在差异[[13]]。并且不同的企业或者单位采用和参考的验证标准既不相同也不改进，加大了药品质量控制的难度。因此需要有效合理的方式和技术手段进行中药制剂的质量一致性评价。

操作环境不规范

《中国药典》2015版规定微生物计数试验应在受控环境下的局部洁净度不低于B级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，且防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。现如今，一些企业和医院的无菌室设计简陋，未设缓冲间，样品和污染物同进同出，操作间有死角，加上人员走动增加了染菌机会，存在很多隐患，对实验结果造成很多不确定因素[[14]]。

无菌操作不规范

部分药检技术人员未受过微生物限度检查的正规培训，所做实验不能真实反映被检制剂的染菌情况。在检验过程中每一个空间、每一个操作、使用的每一种工具或材料，未灭菌的都是带菌者，在灭菌之后仍有可能被菌类污染。每次操作前对操作间的消毒处理必须彻底，不得留有死角；对实验所用器具根据材料的性质进行相应的灭菌；开启供试品包装的工具，如剪刀、砂轮等也应消毒，否则影响细菌计数的准确性。

建议

随着医院制剂的制备工艺及疗效不断发展，国内众多医院制剂微生物限度检查学者进行了大量研究工作，取得了一定成效，微生物限度检查方法也在日渐完善。与国外药典以品种为标准收载相比,我国的微生物限度检查是以剂型为标准[[15]]，同时由于中成药和化学药各有特点，其微生物限度检查法也不能生搬硬套，全部效仿国外。因此，需要投入大量的人力、物力，尽可能快的、有组织性的、系统的进行研究，根据中医药的一些特点及国外药典的本质，建立适合于中药制剂的微生物限度检查方法[[16]]，医院制剂的微生物限度检查是保障医院药品制剂使用安全的重要工作，为确保患者用药安全，医院应重视微生物限度检验工作，增加投入，改善环境，进行实验技术人员培训，消除隐患，以控制医院中药制剂产品质量，为中医药的发展和保证人民群众的用药安全做出贡献。

参考文献：

  1. []国家药典委员会.中国药典2015年版[M].北京：中国医药科技出报社. uarr;

  2. []蔡瑞宏,姚宏,张亚锋,等.芦荟冰片烧伤膏的生肌、镇痛及抗炎作用[J].中国医院药学杂志,2007,27(2):170-172 uarr;

  3. []孙晓萍,欧立娟,宓穗卿,等.冰片抗炎镇痛作用的实验研究[J].中药新药与临床药理,2007,18(5):353-354 uarr;

  4. []何晓静,菅凌燕,刘玉兰.冰片注射液对小鼠实验性脑缺血的保护作用[J].新乡医学院学报,2006,23(1):23-25. uarr;

  5. []夏鑫华,刘亚敏,赵光峰.麝香配伍冰片对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的脑保护研究[J].中国实验方剂学杂志,2009,15(2):42-45 uarr;

  6. []方永奇,邹衍衍,李羚,等.芳香开窍药和祛痰药对中枢神经兴奋性的影响[J].中医药研究,2002,18(3):40 uarr;

  7. []史卫忠,赵志刚.冰片作用下尼莫司汀透过血脑屏障的药动学[J].中国医院药学杂志,2008,28(22):1933-1936 uarr;

  8. []杜杭根,李宏宇,田勇.冰片联合顺铂对大鼠C6胶质细胞瘤的治疗作用[J].浙江中医药大学学报,2010,34(1):35-36 uarr;

  9. []魏楚蓉.冰片的药理作用及其机制研究进展[J].国际病理科学与临床杂志,2010,30（4）：447-451 uarr;

  10. []梁呈元，李维林，张涵庆，等.薄荷化学成分及其药理作用研究进展[J].中国野生植物资源,2003，22(3):9-12 uarr;

  11. []梅全喜，钟希文，高玉桥，等.浓薄荷水抗炎作用实验研究[J].药物研究,2008，17(21):11-12 uarr;

  12. []陶虹.中药制剂微生物限度检查方法研究进展[J].中国药房，2010,21（19）：1813-1815 uarr;

  13. []易伦朝,吴海,梁逸曾.色谱指纹图谱与中药质量控制[J].2008,26(2):166-171. uarr;

  14. []李晓东，李娟，焦正花，等.我国医院中药制剂微生物限度检查存在的问题分析及建议[J].2009,22(12):15-17 uarr;

  15. []胡昌勤.药品微生物控制现状与展望[J].2015,50(20):1747-1751 uarr;

  16. []严佳，钟桂香，贺全山，等.我国药品微生物限度检查的发展历程.药学实践杂志.2010.28(3):211-212 uarr;

以上是毕业论文文献综述，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。

您可能感兴趣的文章