- 选题依据
- 选题的目的及意义
随着当今工业社会的发展和人民生活水平的不断提高，温饱已经不再成为困扰普罗大众生活的头等难题，然而生活品质的提高同时也暴露了新时代民众的新的疾病问题：久坐少动、高脂饮食、超重肥胖、过度饮酒、生活压力过大等慢性疾病危险因素随之而来。近期调查结果显示：心血管疾病已经成为世界上最主要的死亡原因，并且呈现出高发病率、年轻化的趋势，严重危害人类健康。尤其是在我国，从1990年到2017年，中国缺血性心脏病粗死亡率（未标化年龄）上升了155.4%，年龄标化死亡率上升了20.6%。中国冠心病、缺血性卒中、出血性卒中和高血压心脏病的年龄标准化死亡率明显高于美国和西欧，同时伴随着较高的过早（70岁以下）死亡率。从世界范围来看。仅2015年的数据就表明全世界每年约有422.7百万人被诊断患有心血管疾病，而死亡率则高达4.239%，且仍旧呈现上升趋势。除了死亡危险，心血管病的高发病率和高致残率给社会、家庭和患者个人都带来了沉重的经济负担和心理负担。
- 概述国内外研究现状
血浆甘油酸酯（TG）主要存在于乳糜微粒（CM）和极低密度脂蛋白（VLDL）中，其含量的高低则直接影响到动脉粥样硬化性心血管疾病（CVD）。机体内富含甘油三酯的脂蛋白（TRL）含量可反应血浆TG水平，TRL在机体内代谢异常会引起TG升高，进而影响到CVD的发生发展。机体内TRL的代谢过程主要包括合成、水解、残粒清除等几个环节，动脉粥样硬化（As）作为CVD发展的病理学基础，已有相关研究表明TG水平升高可引起低密度脂蛋白（LDL）的增高和高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）的减少，这一脂质三联征称为致As脂蛋白谱，肯定了TG水平与CVD的关联；而CVD患者的TG水平异常较正常人主要表现在餐后TG清除能力的下降和血浆TG含量的升高。
甘油三酯水平升高致As机制[1]主要体现为：1.促使血管内皮功能失调，VLDL和CM对血管内皮细胞具有直接的细胞毒作用，可引起细胞通透性增加，TRL通过内皮屏障进入动脉壁内沉积；此外也有研究表明TRL残粒可以增加血管内皮黏附分子的表达，降低动脉血管的舒张功能；VLDL也可降低血管内皮的纤溶活性，从而抑制内皮细胞修复。2.促进泡沫细胞形成，体外实验证实，VLDL与巨噬细胞共孵后，在巨噬细胞表面LPL的水解作用下，其内部的TG水解为游离脂肪酸，并由细胞摄取重新酯化成富含胆固醇酯的TRL残粒，通过损伤血管内皮、募集单核细胞，促进泡沫细胞的形成。3.诱发炎症反应，最近有研究发现，大量VLDL可诱导巨噬细胞和血管内皮细胞炎性反应，即用VLDL孵育的巨噬细胞中多种炎性因子表达明显上调。
胆固醇在血液中以脂蛋白的形式存在，而血浆中的低密度脂蛋白（LDL）是运输内源性胆固醇的主要载体，其通过结合细胞膜上的低密度脂蛋白受体（LDL-R）被降解和转化。低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）是空腹血浆中的主要脂蛋白，是将胆固醇运到肝外组织的主要运载工具，LDL-R功能缺陷会造成血浆LDL-C清除能力降低；LDL-C通过血管内皮进入血管壁，在内皮下层滞留的LDL-C氧化后被巨噬细胞摄取并吞噬形成泡沫细胞（构成动脉粥样硬化斑块的脂质核心）。因此，LDL-C的含量与心血管疾病的发病率及病变程度相关，被认为是动脉粥样硬化的主要致病因子，其浓度可以与血浆TG浓度一起作为本实验高脂血症患者模型的脂蛋白代谢检测指标。
许多临床治疗试验表明，利用降脂药单一 降低 LDL、升高 HDL 预防 CVD 的方案患者仍然存在 60% ～70%的 CVD 残留风险，而同时联合靶向降低 某些促 As 性脂蛋白颗粒如 TＲL 水平可以大大降低 肥胖、代谢综合征、2 型糖尿病等 CVD 易患人群的 CVD 发病风险[2]。他汀类药物治疗降低LDL-C水平，降低ASCVD的发病率和死亡率，是治疗和预防ASCVD的重要基石。他汀类药物和其他降脂药物（包括ezetimibe和PCSK9抑制剂）联合治疗血管性血管病具有附加的疗效。此外，金丝那单抗和小剂量甲氨蝶呤等抗炎疗法因其治疗ASCVD的疗效和安全性而具有广阔的应用前景。尽管目前服用降脂药物和抗炎药可显著降低血管平滑肌血管病的发生率，但ASCVD患者的发病率和死亡率仍然很高[3]。
抗体融合蛋白是指利用基因工程技术将抗体片段与其他生物活性蛋白融合所得的产物。由于融合蛋白的不同，这种抗体融合蛋白具有多种生物学功能，并且表达的重组蛋白既不影响单链抗体的抗原结合能力，也不影响与之融合的蛋白质的生物学特性。在生物技术药物领域，抗体类药物--单克隆抗体治疗药物的研究和开发呈现出巨大的发展势头[4]。由于对相关分子靶点具有较高的特异性，目前已有一批抗体类药物成功应用于临床癌症治疗。为了进一步提高抗体类药物治疗癌症的疗效，需要提高其对靶向癌细胞的细胞毒性效力。这可以通过将高效力的 '弹头 '效应剂整合到抗体基药物分子中，形成化学共轭物或基因工程融合蛋白来实现[5]。
- 研究内容
将所得到的一种新型抗体融合蛋白通过镍离子亲和柱后进行纯化，再使用BCA法测定蛋白浓度[6]。本部分所有动物实验操作遵守中国药科大学实验动物道德伦理委员会有关规定。雄性6周龄SPF级C57BL/6雄性小鼠购自南京青龙山动物繁殖场许可证号：SCXK(苏)2017-0001。设置两组实验动物：实验组小鼠喂食高脂饲料诱导形成高脂血症模型，使其维持高的血浆LDL-C和TG水平；对照组小鼠喂食正常饲料。给药方式皮下注射给药，给药剂量200 nmol/kg，给药频次每天一次。每周记录进食量和体重变化。每次给药前进行两组实验动物的采血，给药完成后再次采取血样，并将其与同一次未给药时的对应组血样进行横向比较血脂含量，得出该新型抗体融合蛋白对于血浆LDL-C和TG水平的直接作用效果；再将10周的取样数据纵向比较，得出持续喂食高脂饲料的实验组小鼠生理状态的变化，以及药物在动物体内长期的作用效果。
- 选用方法
- 文献分析法
通过对中国学术期刊网、万方数据资源系统中中文数据库；以及Web of Science、SCI Finder等外文数据库的检索利用图书馆资源收集有关资料，并对其进行归纳分析，作为论文的理论参考。
- 实验分析法
通过为期10周的动物实验，获得实验动物在不同时间点的实验数据，即血浆中甘油三酯和低密度脂蛋白水平，通过对比作图与数据处理分析该新型融合蛋白在小鼠体内对于血浆甘油三酯含量的作用效果。
- 时间安排
- 准备阶段
- 2021年1月17日前，确定论文课题。
- 2021年1月18日-2021年3月20日，查阅相关资料并进行整合，完成开题报告。
- 实验阶段
- 2021年3月10日-5月19日，进行实验，收集数据，起草论文。
- 2021年5月20日-2021年5月28日，整理分析实验数据，完成论文撰写。
- 答辩阶段
论文答辩预计在2021年6月1日-2021年6月10日，具体按时间由学院安排确定。
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