HPLC-MS/MS法测定人血浆中的二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)文献综述

 2022-12-07 04:12

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

1. 研究或拟解决的问题

DHA是神经系统细胞生长及维持的一种主要成分,是大脑和视网膜的重要构成成分,在人体大脑皮层中含量高达20%,在眼睛视网膜中所占比例最大,约达50%。目前研究表明,DHA具有促进胎儿大脑发育和视网膜光感细胞的成熟的作用,还能减少产后抑郁、抑制炎症反应、利于癌症治疗等。EPA是鱼油的主要成分,具有帮助降低胆固醇和甘油三酯含量的作用,促进体内饱和脂肪酸的代谢,从而降低血液粘稠度,增进血液循环。DHA和EPA是人体自身不能合成但又不可缺少的重要营养素,因此成为人体必需脂肪酸。虽然亚麻酸在人体内可以转化为DHA和EPA,但远远不能满足人体的需求,因此必须从食物中直接补充。

现今有多种保健品中都含有DHA和EPA,例如欧米加-3-酸乙酯90软胶囊中含有来自鱼油的omega;-3脂肪酸乙酯,其中主要包括EPA和DHA,其主要作用是辅助饮食,降低重度高甘油三酯血症成人患者的甘油三酯水平。因此,建立快速灵敏的人体血浆中DHA和EPA的含量测定方法对研究此类药物的药代动力学过程具有重要意义。

2.研究进展

关于人体血浆中DHA和EPA的定量测定方法已有文献报道,传统的测定方法是采气相色谱法(GC)或者气质联用(GC-MS)技术[1]-[2],但需要较麻烦的样品预处理过程和较长的分析时间。而液相色谱串联质谱法方法(LC-MS/MS)由于在灵敏度、特异性、分析速度等方面的优势,在生物样品分析中的应用越来越广泛。目前已有液相色谱串联质谱法对血浆中的DHA和EPA进行测定的报道。Chester L. Bowen等人报道了使用UHPLC-MS/MS测定人体血浆中游离DHA和EPA以及总DHA和EPA的浓度得方法,仪器采用API4000型三重四级杆质谱仪,以选择性反应离子监测(SRM)模式测得游离DHA和EPA的线性范围在0.05mu;g/ml至25mu;g/ml,总DHA和EPA的线性范围为0.5mu;g/ml至250mu;g/ml[3]。Paul Salm 等人运用HPLC-MS/MS同时测定了人体血浆中的DHA和EPA。[4]

3. 采用的研究手段

近年来,液相色谱-串联质谱技术已广泛应用于药物开发阶段的药代动力学和药物代谢物研究。液相色谱串联质谱技术结合了色谱及质谱的优点,将色谱的高分离性能和质谱的高鉴别特点相结合,提高了对样品分析的灵敏度及选择性,并能提供化合物的相对分子量和结构信息。在对药物的定量研究中,常用的质谱为串联四级杆质谱,常用的生物样品有全血、血浆、尿液、粪便、组织等,通过沉淀蛋白、液液萃取、固相萃取等技术对其进行预处理后进行测定。所采用的大气压化学离子源是在生物质谱分析中最常用的离子源之一。

本实验拟采用Waters公司ACQUITY I Class system液相色谱系统和AB SCIEX 公司TRIPLE QUARD 5500三重四级杆串联质谱,通过对样品预处理条件,色谱条件及质谱条件等方面优化,建立灵敏、更快速、专属性好、定量下限更低、操作简便的液相色谱-串联质谱方法测定人体血浆中DHA和EPA的浓度,以期应用于药物代谢动力学研究中。

4.研究方案与进程安排

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