重组弓形虫SAG1蛋白纯化及鉴定文献综述

 2022-12-07 04:12

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

一、立题背景及研究现状

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii Nicolle amp; Manceaux,1908)简称弓形虫、弓浆虫,是一种专性细胞内寄生的机会致病原虫,寄生于人、畜、野生动物、鸟类及一些冷血动物的有核细胞,该虫呈世界性分布,可感染人和200多种动物,引起人兽共患弓形虫病(toxoplasmosis)[1]

人类对弓形虫有较强的自然免疫力,感染后绝大多数无明显症状表现,或只出现亚急性弓形虫病,当机体免疫功能受损时,可出现多种临床表现。孕妇感染弓形虫可引起胎儿先天感染或引发流产、畸胎、死胎等[2]。据文献报道,全世界约有5亿~10亿人受到感染。该病不但威胁人类健康,亦严重影响畜牧业发展。近年来, 随着研究的深入,人们发现,弓形虫病的流行表现出许多新的特点,危害远远超出了人们的估计。这些新特点主要表现在:与动物其他病原混合感染,危害加重;鸡群与其他鸟类感染普遍,是重要传染源;野生动物感染严重,具有自然疫源性;海洋和水生动物感染,水体被污染;经水和肉品传播,引起人类群体感染;隐性感染对人群危害严重[3]

弓形虫的表膜蛋白抗原(SAG),为相嵌于细胞膜的糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白质,由SAG基因家族编码。研究发现,弓形虫主要膜抗原族SAG系列与弓形虫侵入,粘附及细胞毒性密切相关,被认为是破坏宿主细胞关键反应的主要蛋白。SAG1蛋白在介导弓形虫速殖子入侵宿主细胞以及引发宿主免疫反应的过程中发挥了重要作用。很多研究者尝试利用 SAG1作为一种疫苗亚单位来治疗弓形虫感染,能刺激机体产生高效价的抗体,对机体产生保护作用,已成为预防弓形虫感染的重要候选疫苗分子,SAG1重组抗原作为诊断抗原已经运用于弓形虫速殖子感染的免疫学检测。

从虫体自身表达看,弓形虫自身表达SAG1蛋白含量不高,所以想从速殖子中直接大量提取并纯化这种蛋白既费时又费力。然而随着分子生物学基因工程技术的日趋成熟,应用基因工程的方法获取重组蛋白,将是一条获取大量抗原蛋白的有效途径。为弓形虫抗原蛋白的深入研究奠定基础,也为分子疫苗研究提供新思路。

因此,分离纯化在大肠杆菌中稳定表达的重组SAG1蛋白并且鉴定其分子量,以期获得大量纯化有活性的SAG1 重组蛋白,为弓形虫病快速诊断试剂盒以及后续复合型弓形虫疫苗的研制和应用奠定基础。[4]

二、拟研究的问题

表达和纯化重组弓形虫SAG1蛋白,并对其进行分子量鉴定,为弓形虫病快速诊断试剂盒及蛋白质疫苗的研制奠定基础。[5]

三、采用的研究手段

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