益气复脉粉针抑制缺氧复氧诱导大鼠H9c2心肌细胞凋亡的作用研究文献综述

 2023-01-13 11:01

开题报告

一、拟研究或解决的问题：

本课题拟在前期研究基础上，制备缺氧/复氧诱导H9c2心肌细胞损伤模型，以模拟临床上心肌缺血再灌注损伤，探讨益气复脉粉针的保护作用机制，为其临床应用提供药理学依据。

二、采用的研究手段：

1 H9c2细胞的培养

选用稳定的大鼠H9c2心肌细胞株，用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养，长满瓶底的80%时，倒去培养基，PBS洗两次。以0.25%的胰蛋白酶消化1 min，倒置显微镜下观察，当细胞皱缩变圆，彼此分开时加含血清的DMEM培养基终止消化，轻轻吹打使细胞悬浮，1000 rpm/min离心5 min，弃上清，2 mL培养基吹散，按1：6的比例接种于培养瓶中，置于37℃培养箱中培养。选均匀铺满瓶底，排列整齐，胞浆饱满，生长良好状态均一的细胞供实验用。

2 缺氧复氧模型的制备

选择处于指数生长期的H9c2大鼠心肌细胞，消化后，用含10%胎牛血清的DMEM培养基重悬，接种于96孔板，正常条件培养，待细胞进入对数生长期，建立物理学缺氧/复氧模型：将细胞用预先经94% N2 5% CO2 1% O2 混合气饱和1 h的无糖培养基置换正常培养液，后放入通有94% N2 5% CO2 1% O2 的37 ℃培养箱缺氧培养3、6、9、12、24 h；再将缺氧后的心肌细胞换用预先用94% N2 5% CO2 1% O2 饱和的DMEM高糖培养基（含10%血清），在正常培养条件下复氧2、4、6、12 h。以确定最合适的缺氧/复氧时间。

3 MTT比色法测定细胞活力

取对数生长期H9c2大鼠心肌细胞，消化后，接种于96孔培养板，37 ℃、5% CO2饱和湿度下培养。各实验组细胞经处理后，加入已配制好的MTT溶液（5 mg/mL）孵育4 h后移弃培养液，每孔加入150 mu;L DMSO，振荡10 min，使结晶物充分溶解。用酶标仪在波长为570 nm处测定吸光度。并计算细胞活性。

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