开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）背景胰腺癌是一种恶性程度很高，诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤。
在西方国家，胰腺癌的死亡率已升至第4位；在我国，胰腺癌是消化道恶性肿瘤的三大死亡原因之一，且大多数患者发现时间较晚，手术切除率仅占15%左右，术后预后差，5年存活率约5%。
目前对于胰腺癌的治疗方法包括手术、化疗、放疗、药物联合治疗等，以吉西他滨为主的化疗是其他多种模式的基础，可以改善患者的预后，但随着化疗次数的增加，胰腺癌细胞对吉西他滨的药物敏感性降低，随之产生耐药性，降低疗效。
吉西他滨（Gemcitabine）为一种新的胞嘧啶核苷衍生物。
为嘧啶类抗肿瘤药物，作用机制和阿糖胞苷相同，其主要代谢物在细胞内掺入DNA，主要作用于G1/S期；并抑制核苷酸还原酶，导致细胞内脱氧核苷三磷酸酯减少；还能抑制脱氧胞嘧啶脱氨酶减少细胞内代谢物的降解，具有自我增效的作用。
地高辛（Digoxin）是一种中效强心苷类药物，但它在与其他药物联合使用时往往会引起血药浓度发生变化，故基于此种影响利用各种方法研究吉西他滨与地高辛合用以逆转胰腺癌耐药。
研究方法1. 细胞培养SW1990，Panc-1，SW1990/Gem和Panc-1/Gem细胞培养于37℃含5% CO2 的培养箱中，使用含10%胎牛血清、20 mmol /L NaHCO3 、20 mmol /L羟乙基哌嗪乙磺酸、100 U /ml青霉素和100 U /ml链霉素的DMEM完全培养基，细胞单层贴壁生长，待培养瓶中细胞生长至70%～80%时，用胰蛋白酶消化传代。
2.MTT法检测细胞增殖 收集细胞，制成单细胞悬液，接种于96孔板，5103/孔，细胞贴壁后，分别加入0，5，10，20，40，80，160 mu;mo l /L浓度吉西他滨或0，5，10，20，40，80，160 mu;mo l /L浓度吉西他滨联合20，40，80 nmol /L浓度地高辛，每组重复5孔，同时设空白对照，培养24 h后，各孔加入MTT 100 mu;g，继续孵育4 h，加入120mu;l二甲亚砜(DMSO )，振荡混匀后利用酶标仪测A490值。
3. 克隆形成实验收集细胞，制成单细胞悬液，将约500个细胞接种到6孔板中。
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