小金丸中麝香酮的含量测定方法确认文献综述

课题名称

小金丸中麝香酮的含量测定方法确认

毕业设计的内容和意义

小金丸是一种中成药，为理血剂，具有散结消肿，化瘀止痛之功效。主治痰气凝滞所致的瘰疬、瘿瘤、乳岩、乳癖。症见肌肤或肌肤下肿块一处或数处，推之能动，或骨及骨关节肿大、皮色不变、肿硬作痛。麝香作为小金丸的主要成分之一，有效成分是麝香酮，作用是走窜通络，散结开壅。其含量是否达到标准药效，有国家相关标准分析方法控制药物质量。首次使用小金丸中麝香酮含量测定分析方法时，按照2020版中国药典方法开展样品试验，现有分析人员对分析方法中关键的验证指标进行有选择性的考察，证明该方法对样品的适用性及分析人员有能力于使用该法定的含量测定方法在该实验室中进行实验。通过对前人及标准的总结与完善，设计研究方案以指导未来计划的实践。

文献综述

小金丸中麝香酮的含量测定方法研究

摘要：现为证明法定分析方法对不同实验室、不同仪器设备、不同实验人员、不同批次或供应商供试品的检验过程适用性，整理、学习与小金丸中麝香酮的含量测定方法相关的国内外标准及文献进行综述。

用于含量测定方法主要包括滴定法，液相法，可见--紫外分光光度百法，气相色谱，柱层析法，折光率测定法，试纸法，燃烧法等。作为有机分子，麝香酮的含量测定常用色谱法。根据对国内外大量文献及标准的搜集及整理，发现研究者多采用气相色谱法；也有文献记载使用超高液相色谱法及质谱联用，将包括麝香酮在内的其他有效物质检测出来[10]。药典中的规定方法气相色谱法具有良好的分离能力和高灵敏度，适合于麝香酮的分析。本文主要介绍气相色谱法的含量测定分析实验。

关键词：小金丸；麝香酮；气相色谱法

前言：小金丸是一种中成药，为理血剂，具有散结消肿，化瘀止痛之功效。主治痰气凝滞所致的瘰疬、瘿瘤、乳岩、乳癖。症见肌肤或肌肤下肿块一处或数处，推之能动，或骨及骨关节肿大、皮色不变、肿硬作痛。麝香作为小金丸的主要成分之一，有效成分是麝香酮，作用是走窜通络，散结开壅。其含量是否达到标准药效，有国家相关标准分析方法测定。首次使用小金丸中麝香酮含量测定分析方法时，按照2020版中国药典方法开展样品试验，现有分析人员对分析方法中关键的验证指标进行有选择性的考察，证明该方法对样品的适用性及分析人员有能力于使用该法定的含量测定方法在该实验室中进行实验。

1 含量分析的控制标准

2020版中国药典公示稿要求，本品每1g含麝香以麝香酮（C 16 H 30 O）计，不得少于0.18mg；含人工麝香以麝香酮（C 16 H 30 O）计，不得少于0.63mg。

2 小金丸中麝香酮的含量测定[3]

小金丸时中国药典收录的重要成方制剂，由麝香、木鳖子、制草乌、枫香脂、醋乳香、醋没药、醋五灵脂、酒当归、地龙、香墨十味药组成。对于已知麝香的有效成分麝香酮，根据有机溶剂的性质确定色谱条件，在中国药典中规定了具体的检测方法，照气相色谱法测定[3,4]。

2.1色谱柱的选择：以（50%-苯基）-甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱（柱

长为 30m，柱内径为 0.25mm，膜厚度为 0.25mu;m）。新填充柱和毛细管柱在使用前需老化处理，以除去残留溶剂及易流失的物质，色谱柱如长期未用，使用前应老化处理，使基线稳定。

2.2试剂配制：

对照品溶液的制备：取麝香酮对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.4mg（检测人工麝香）或0.1mg（检测麝香）的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙酸乙酯15ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）30分钟，放置至室温，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3进样方法的确认（及温度和时间的选择）：GC有直接进样、自动进样或顶空进样，多采用前者。溶液直接进样采用微量注射器、微量进样阀或有分流装置的气化室进样；采用溶液直接进样或自动进样时，进样口温度应高于柱温30～50℃；进样量一般不超过数微升；柱径越细，进样量应越少，采用毛细管柱时，一般应分流以免过载。

2.4检测器的选择：氢火焰离子化检测器对碳氢化合物响应良好，适合检测大多数的药物，因此定量常用氢火焰离子化检测器（FID）。TCD也是通用性检测器，但其灵敏度较低，多用于农药残留检测。还有氮磷检测器（NPD）、火焰光度检测器（FPD）、电子捕获检测器（ECD）、质谱检测器（MS）等。氮磷检测器对含氮、磷元素的化合物灵敏度高；火焰光度检测器对含磷、硫元素的化合物灵敏度高；电子捕获检测器适于含卤素的化合物；质谱检测器还能给出供试品某个成分相应的结构信息，可用于结构确证。

2.5 测定法：根据文献指出，内标法和外标法均可适用[8]，以毛细管柱系统程序升温法为主，色谱条件：初始温度为 120℃，以每分钟3℃的速率升温至220℃，保持10分钟，再以每分钟6℃的速率升温至250℃，保持5分钟；进样口温度为220℃；检测器温度为250℃。分别精密吸取对照品溶液1mu;l、供试品溶液2～3mu;l，注入气相色谱仪，测定，

即得。

3 检测指标

《分析方法验证指导原则》中提供了建立分析方法需要验证的指标，分析方法的确认并不是重复验证过程[2]。分析方法确认无需对法定方法进行完整的再验证，但是需要将《分析方法验证指导原则》表 1 中列出的分析方法验证的指标用于方法的确认[2]。

3.1系统适用性：样品溶液检测，检测过程符合要求，检验结果符合质量标准要求。色谱图中，待测物色谱峰与其相邻色谱峰的分离度应大于1.5。麝香酮的含量测定以外标法测定，所得待测物峰面积的RSD应不大于10%。

3.2定量限：（Limit Of Quantitaion，LOQ）系指试样中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应符合准确度和精密度要求。将试样用适量溶剂多次稀释并与空白样品测出的信号比较，一般以信噪比S/N为10时相应浓度或注入仪器的量确定定量限。

3.3检测限：(Limit Of Detection，LOD)系指试样中被测物能被检测出的最低量。检测限仅作为限度试验指标和定性鉴别的依据，没有定量意义。将试样用适量溶剂多次稀释并与空白样品测出的信号比较，一般以信噪比S/N为 3:1或 2:1 时相应浓度或注入仪器的量确定检测限。

3.4稳定性：在规定的测定条件下，证明同一样品在某些检验环境不同时间、不同人员、不同仪器、不同实验室）变化时，检验结果不受影响，该方法都同样适用。根据环境变化程度不同，精密度验证又分为重复性、中间精密度和重现性。稳定性一般用标准偏差或相对标准偏差表示。小金丸中麝香酮含量测定以不同时间进样，考察峰面积检验结果是否受到影响。

3.5方法测试：用法定方法在该实验室中进行完整的小金丸中麝香酮的含量测定实验，证明该方法的条件可用且在该实验室适用。

结语：本类实验主要应用药典方法，若该方法适用，则可缩短检测时间，而且GC法操作简单、检测灵敏度较高，选择性较好、毒性小，采用此法所需的样品用量较少，可以满足小金丸中麝香酮含量测定的要求。采用GC法时，需要结合药物和所要检测的溶剂的性质，通过方法学验证指标研究确定合适的检测条件。

参考文献：

[1]9099分析方法确认指导原则（第一次征求意见稿）.

[2]9101分析方法验证指导原则（第一次征求意见稿）.

[3] 小金丸 公示稿-1485804089.pdf.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].四部.北京:中国医药科技出版社,2015:423-424.

[5]齐晓妍,安培培,李春义,常彤,高兵.麝香酮含量测定分析方法的研究进展[J].特产研究,2016,38(01):63-68.

[6]平欲晖,毛红梅,关志宇,宗星星.气相色谱法测定小金丸中麝香酮的含量研究[J].江西师范大学学报,2011,35(3):263-265.

[7]任睿,陈新国,李磊,袁少雄,陈娇娇,张园园.GC法测定羚黄宝儿丸中麝香酮、冰片、丁香酚的含量[J].世界中医药,2015,10(03):420-422.

[8]万佳丽,明凯利,向阳,林凤杰,王丫头,熊莉,周翔,余敏,黄志军.小金胶囊中麝香酮含量测定方法研究[J].世界中医药,2020,15(04):533-537.

[9]骆瑞林.麝香酮的含量测定方法研究进展[J].中国药业,2015,(第10期).

[10]蔡博,董林毅,王静等. 超高效液相色谱质谱联用技术同时测定小金丸中7种成分的含量[J]. 中国药学杂志, 2015, 050(008):718-721.

研究内容

整理学习与小金丸中麝香酮的含量测定方法相关的标准及文献，参考国内外药典标准，设计并完善分析方法确认研究实验方案，证明法定方法对不同实验室、不同仪器设备、不同实验人员、不同批次或供应商供试品的检验过程适用性。小金丸中含有人工麝香，照气相色谱法进行测定，进行检测限、定量限、随性对照、稳定性、方法测试等指标考察。

1. 对照品和供试品溶液浓度确定及配置

2. 仪器设备

2.1仪器要求：容量瓶、移液管、进样瓶等

2.2精密仪器要求：气相色谱仪、毛细管柱、电子天平等

3. 确认要求

3.1操作人员

3.2所用计量分析仪通过检验具有效合格证

4. 引用标准：中国药典2015版、2020公示稿

5. 气相色谱法

5.1色谱条件：照气相色谱法测定，以公示稿中色谱条件测定。

5.1.1色谱柱：（50%-苯基）-甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱（柱

长为 30m，柱内径为 0.25mm，膜厚度为 0.25mu;m）

5.1.2进样方法及温度条件：程序升温，初始温度为 120℃，以每分钟3℃的速率升温至220℃，保持10分钟，再以每分钟6℃的速率升温至250℃，保持5分钟；进样口温度为220℃

5.1.3检测器：FID，检测器温度为250℃

6. 验证指标

6.1系统适用性：待测物色谱峰与其相邻色谱峰的分离度应大于1.5，RSD符合要求。

6.2定量限：S/N为10

6.3检测限：S/N为 3:1或 2:1

6.3稳定性：分别在0h、2h、6h、12h、18h、24h、36h、48h时进样，观察峰面积、保留时间等受时间的影响，RSD应符合要求。

6.5方法测试：用法定方法在该实验室中进行完整的小金丸中麝香酮的含量测定实验，证明该方法的条件可用且在该实验室适用。

7. 数据综合分析，得出结果。

研究计划

1. 2020年5月13日-19日：查看任务书，准备文献综述，撰写并上传开题报告。

2. 5月13日-19日：完成实习中期检查。

3. 5月20日-6月3日：完成后期实验，对实验数据分析总结，完成毕业论文草稿。

4. 6月4日-18日：完善毕业论文，参加答辩，并按要求修改，论文定稿。

特色与创新

五. 特色与创新

供试品配置使用溶剂量增加，减少小金丸中其他物质因浓度过高而产生对麝香酮含量测定较大的影响，大大降低杂质浓度的同时降低耗材成本，减少对色谱柱的损耗及仪器耗材的使用。

另外，相较于高效液相色谱法、气质联用法等，气相色谱法分离效率高、分析速度快、灵敏度高、定量精度高、定性重复性好、设备简单，对于企业有更好的优势。