柳树种间杂交F1真实性鉴定文献综述

 2022-07-20 09:07

文献综述

1. 分子标记技术的发展现状

分子标记是继形态标记、细胞标记和生化标记之后发展起来的一种较为理想的遗传标记形式。目前,常用的分子标记技术有RFLP、RAPD、AFLP、SSR、ISSR、SNP。这些DNA分子标记技术与形态标记和生化标记等方法相比,具有①不受组织类别、发育阶段等影响;②不受环境影响;③标记数量多,遍及整个基因组;④DNA分子标记技术简单、快速、易于自动化;⑤有许多标记表现为共显性,能够鉴别纯合基因型和杂合基因型,提供完整的遗传信息。但在使用分子鉴别方法时,应根据分子标记的特点进行针对性的选用。

1.1 RFLP标记特点及其应用

限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism ,简称RFLP)是发展最早的DNA标记技术。RFLP是指基因型之间限制性片段长度的差异,这种差异是由限制性酶切位点上碱基的插入、缺失、重排或点突变所引起的。

自Grodzicker等(1974)应用RFLP作为遗传分析工具以来,首先在研究人类基因组中发展起来,RFLP位点与遗传性疾病的连锁,他的个体特异性与遗传稳定性为产前诊断和法医鉴定提供了方便可靠的方法(Little et al.,1980),以RFLP为标记的人类遗传图谱已经构建(Botstein et al.,1988)。在我国RFLP已应用于某些遗传疾病的诊断,并开始了在法医学中的应用研究(李伯龄等,1989)。然而在实际的推广应用过程中仍然是相当费时、费钱的。加之,RFLP对DNA的需要量较大(5-10ug),需要的仪器设备较多,技术也较为复杂,因而目前很难应用于实际的植物品种遗传鉴别。

1.2 RAPD标记特点及其应用

随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,简称RAPD)技术是1990年发明并发展起来的,RAPD是建立在PCR (Polymerase Chain Reaction)基础之上的一种可对整个未知序列的基因组进行多态性分析的分子技术。

在有些学者的研究中表明,用RAPD分子标记和ISSR分子标记技术鉴定木材,结果准确、耗材少、不受时间和环境的限制,拓宽了木材识别的范围,提高了木材识别的精确性。采用琼脂糖凝胶电泳进行分子鉴定节约了实验经济成本,这不仅在进出口树种鉴定中意义重大,在巨大的木制品消费市场及相关其他领域也具有广泛的应用前景和开发利用价值(骆嘉言,王英等,2017)。但是,RAPD技术较易受到各种因素的影响。无论是模板的质量和浓度,短的引物序列,PCR的循环次数,基因组DNA的复杂性,技术设备等,都有可能是RAPD技术重复性差的直接原因。

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