开题报告内容：
拟研究或解决的问题
在蛋白质翻译过程中，D-Tyr-tRNA脱酰基酶能够水解去除负载在tRNA上的D-Tyr以及其他的D型氨基酸，此酶具有较宽的底物特异性，能够移去tRNA3rsquo;端不同的D-氨酰基部分，从而减少D型氨基酸插入到蛋白质中。本实验尝试将抑制D型氨基酸插入的D-Tyr-tRNA脱酰基酶基因(dtd1)从宿主中敲除，从而将D型氨基酸插入到蛋白质中，为研究D型氨基酸对蛋白结构功能的影响做准备。
采用的研究手段
本实验采用lambda;-Red同源重组技术，通过引物设计,质粒转化,PCR扩增,DNA序列片段电转,抗性筛选技术以及菌液PCR技术,以期将dtd1基因从BL21(DE3)中进行敲除，达到提高D-氨基酸插入蛋白质中的效率。
文献综述
同源重组方法敲除D-Tyr-tRNA脱酰基酶基因
1.D-氨基酸的分布和研究意义
自然界中,除少数低等生物外,生物体中的蛋白多肽都是由L型氨基酸组成，所以我们对L型氨基酸了解相对较多，而对D型氨基酸则是在实验室人工合成后才认识的[1]，人们也因为它是人工合成的而对它研究甚少。但近20年来的研究，发现不少D型氨基酸在微生物、动物植物中都广泛存在。据不完全统计，高等动植物中的D型氨基酸有10种左右，微生物中的D型氨基酸种类不少于24种，含量虽少，种类却多[1]，它们常见于细菌细胞壁的肽聚糖、肽类抗菌肽、麦角碱以及动植物中的肝肾组织液中[1]。
进一步的研究发现，在人体内,存在着高浓度的D型氨基酸,并且这些D型氨基酸具备着重要的生理功能。在中枢神经系统中存在着高浓度的D型丝氨酸和D型天冬氨酸。D型丝氨酸作为神经系统中起着多种重要功能的谷氨酸受体NMDA受体的生理配基,起着非常重要的作用[2]。而D型天冬氨酸不仅在神经系统总可以起到神经递质/神经调制的作用,在内分泌系统中还起着至关重要的作用[2]。D型氨基酸的存在与疾病有关，如D-Asp存在于阿尔茨海默症患者脑中和老年动脉硬化患者主动脉中，D 型氨基酸它的增加与年龄和衰老有关等[1]。
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