小白菊内酯抑制胰腺癌的作用机制研究文献综述

 2023-01-11 04:01

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

一、 拟研究或解决的问题

小白菊内酯(Parthenolide, PTL)是从传统药用菊科植物中提取的倍半萜烯内酯类化合物,具有抗炎,抗肿瘤,抗动脉粥样硬化等多种药理活性。前期工作已明确小白菊内酯对胰腺癌细胞有杀伤作用,并通过染色质免疫共沉淀得到了一些可能参与到PTL抑制胰腺癌的分子机制中的目的基因,本课题将对这些目的基因进行验证。

二、 采用的研究手段

2.1 细胞培养

本实验对正常胰腺细胞和胰腺癌细胞进行无菌贴壁培养,并进行梯度浓度的药物处理,为后续的实验提供样本。

2.2 总RNA提取及荧光定量PCR

通过变性剂破碎细胞,然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA,再经过离心沉淀等得到RNA。通过RT-PCR将RNA转换为cDNA,并以此cDNA为模板进行荧光定量PCR反应,观察目的基因的在药物总用后是否在转录水平发生变化。

2.3蛋白裂解及 Western Blot

利用RIPA裂解液裂解细胞获得细胞内全蛋白,通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的蛋白样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度得到蛋白质在细胞中的表达情况。

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