一、文献综述
近年来，恶性肿瘤的发病率与死亡率持续上升，成为全球主要死因之一。抗体药物是目前肿瘤治疗的重要方法。普通的抗体只能结合单一的抗原，且不能有效聚集肿瘤组织处进行杀伤。研究者针对这些问题设计出双特异性抗体，这种抗体可以同时与两种不同的抗原特异性结合，介导多条信号通路，从而增强杀伤毒性，达到更好的治疗效果。
Notch通路是一条在进化过程中高度保守的信号通路，由受体、配体和 DNA 结合蛋白3部分组成，在维持肿瘤干细胞特性，细胞命运决定，细胞分化以及肿瘤血管生成中发挥重要作用[1]。在哺乳动物中，已发现4个同源Notch 受体和5个同源Notch配体，其中配体分别为Delta-like1、3、4(Dll1，3，4)和Jagged1、2[2]。Notch基因具有致瘤及抑瘤作用，具体作用根据肿瘤类型而异，且在每种肿瘤中只会显示一种作用。目前证明Notch异常激活会导致乳腺癌、T细胞急性淋巴细胞白血病[3]和肝外胆管癌[4]等癌症。激活过程需要受体和配体结合[5]。因此，通过设计受体和配体的抗体来阻断结合过程即可抑制Notch激活。
DLL4是五种Notch配体中的一种。研究表明，DLL4在多种肿瘤组织中过表达，并对血管发育及动脉生成至关重要[6]。目前，在胰腺导管腺癌[7]、乳腺癌[8]、胃癌[9]中均发现DLL4的过表达。血管系统可以为组织细胞运输所需的氧气及营养，因此，血管生成对于肿瘤生长意义重大。DLL4功能缺失会导致血管增殖增加，但发育不成熟，肿瘤细胞营养供应不足，从而抑制肿瘤生长[10]。
血管内皮生长因子（VEGF）是一种特异性的促血管内皮细胞生长因子，参与整个血管新生过程。VEGF有6种异构体（VEGF-A、B、C、D、E、F）和三种受体（VEGFR-1 、VEGFR-2、VEGFR-3）。其中，VEGF-A是血管新生的主要因素，VEGFR-3与VEGF-C与VEGF-D结合参与淋巴管生成[11]。VEGF是刺激肿瘤血管生长最强的刺激因子，主要通过其下游PLCgamma;1、PI3K-AKT信号通路促使血管内皮有丝分裂并形成新生血管。因此，VEGF/VEGFR途径同时介导肿瘤血管生成及淋巴管发育。肿瘤生长需要血管提供营养物质，而淋巴管生成则对肿瘤扩散具有重要意义。应用针对VEGF及其受体的抗体治疗可在一定程度上抑制肿瘤的发生、发展和转移。
DLL4/Notch通路与VEGF通路之间存在crosstalk。研究发现，药理学抑制VEGF可减少DLL4表达，而使用外源性VEGF则可上调DLL4表达[12]，因此，VEGF对DLL4的表达有一定的调节作用。在血管内皮细胞分化为功能不同的顶端细胞和茎细胞的过程中，Notch可将信号反馈给VEGFR2/3,调节VEGF受体数量来反馈调节VEGF信号通路。
综上所述，DLL4/Notch通路对维持干细胞特性具有重要意义，而VEGF是肿瘤血管生成的重要因素，且两者之间具有相互调节作用。在临床应用上，双特异性抗体表现出价格低，治疗效果好的显著优势，具有广阔的应用前景。因此，本课题计划构建抗DLL4/VEGF双特异性抗体，获得重组全人源靶向DLL4/VEGF的双特异性抗体基因，采用CHO-s稳转，筛选抗体高产细胞株。抗VEGF/DLL4双特异性抗体可同时阻断两条通路，两者相互补充，以获得更好的抗肿瘤效果。
参考文献
[1]Yu-Yue Zhao,Guang-Tao Yu,Ting Xiao.The notch signaling pathway in head and neck squamous cell carcinoma:A meta-analysis[J].Adv Clin Exp Med,2017,26(5):881-887.
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