开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
CHO-K1细胞转染工艺摸索与评估
- 研究的目的和意义
CHO细胞是中国仓鼠卵巢细胞，是生物工程上广泛使用的细胞系。该细胞具有一种很特殊的特性----具有不死性，可以传递数十代乃至百代以上，因此该细胞是生物工程上最为广泛使用的细胞。除此以外，CHO细胞还有一个突出的特点。由于该细胞属于成纤维细胞，是一种非分泌型细胞，因此它本身会很少分泌CHO内源蛋白，因此十分的利于蛋白质的分离纯化经常在基因工程之中应用，CHO为表达复杂生物大分子的十分理想宿主。我们在工业生产上应用较多的是CHO-K1细胞，为转化细胞系，细胞染色体分布频率是2n=22，系亚二倍体细胞。本设计旨在从各个方面出发，从培养细胞一直到转染成功查看转染效率，从而研究出在最适合CHO-K1细胞电转的环境条件,摸索出更加成熟的电转工艺。从而提高CHO细胞电转的成功率，从而增加电转效率，为之后的一系列实验研究打下良好的基础。
- 研究的方法
- 文献资料法：通过查找网络上的各种资料，在已有的资料之中，前人的研究之中找出相对而言适合我们实验过程的反应条件；
- 实验验证法：借助于我们之前查询的资料获得的数据，按照现实情况适时地调整使其适合我们的试验要求条件，进行实验，从而获得相应的数据。
3、总结归纳法：对于我们在实验之中的数据，进行处理，分析，总结归纳，最终获得实验成果，即CHO-k1转染的最适的条件。
- 研究的内容
根据已有的资料，以及电转的一般流程，我们将过程进行细分，并且根据每一步的实验要求不同，对实验进行控制变量，例如对转染液浓度的选择，细胞培养条件的选择，对质粒种类的选择，乃至于对于电机杯的生产厂家型号的选择，从而分析出在反应过程之中其中最为合适的反应条件来获得最大的转染效率并且让转染后的细胞处于相对而言较高的一个活率。除此以外，
不光光对于实验条件进行研究分析，对于电转过程中的实验操作也要进行一定的研究，从电转参数的设置，电转操作的选择，电转前后对于细胞的处理方法的选择，根据最终的转染指标与之前设计的指标进行相应的分析比对，从而对于CHO-K1细胞转染工艺摸索与评估，完成我们的实验，得出我们最终所需要的结果。
- 研究现状分析
经过长时间的资料查询，最终整理出以下的一系列资料，对CHO-K1细胞转染工艺的应用的广泛和多样程度有了进一步的认识，对于本次的研究课题也有了更深刻的理解。下列文献信息均来自于中国知网CNKI数据库、中国期刊全文数据库、万方数据库、百链数据库。
研究现状分析：
李向茸老师的研究----“重组小鼠碱性成纤维细胞生长因子在CHO-K1 - SFS 细胞中的表达”，构建小鼠碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF，亦称 FGF-2）的真核表达质粒，通过转染使其于无血清悬浮培养的 CHO-K1-SFS 细胞中进行表达。这一研究的成功发表，直接证明我们已经可以成功的将动物相应的基因（乃至于是重组基因）通过转染进入CHO-K1细胞之中，并且能够在其中顺利表达。[1]
除此以外，李向茸老师还通过人工合成基因，并藉此构建白细胞介素-7（interleukin-7，IL-7）基因慢病毒表达载体，通过电转使其在 CHO-K1 细胞中能够稳定表达，为生产试剂级的 IL-7 奠定基础。这一项研究也是在对于CHO-K1细胞转染的一个较为重要的的进步，表明了慢病毒表达质粒能在一定的条件下能够稳定的转染进入并且能够在CHO-K1细胞稳定的存在。给我们后来研究人提供了一个可以使用的质粒途径。[2]
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