LYG202对NLRP3炎症小体的作用研究文献综述

 2022-12-17 18:57:51

开题报告内容：

  1. 课题背景

汉黄芩素是一种来源于黄芩系唇形科植物黄芩的干燥根的黄酮类化合物，实验研究表明汉黄芩素具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤的生物活性。LYG202是带有甲基哌嗪侧链的汉黄芩素衍生物。目前的研究表明，LYG202通过诱导肿瘤细胞凋亡周期阻滞发挥抗肿瘤作用[1]。在肿瘤和炎症之间存在转化关系，因此该化合物对炎症的作用还有待阐释。

炎症小体是一种蛋白复合物，可通过介导IL-1beta;和IL-18的加工和分泌来对炎症反应进行调控。NLRP3炎症小体是相关研究领域内较为热门的类型，其通过对IL-1beta;和IL-18的加工来对炎症反应进行调控[2]。

目前关于LYG202对炎症的调控作用的研究还较少，因此以NLRP3炎症小体为切入点，探究LYG202在抗炎方面的药理作用可推动相关领域的发展，为NLRP3炎症小体深入研究提供理论基础。

  1. 课题目的

探究LYG202对NLRP3炎症小体的作用，揭示LYG202在抗炎方面的药理作用，为进一步研究LYG202对炎症反应的调控机制提供理论基础。

  1. 课题意义

阐明LYG202的抗炎作用，为进一步筛选抗炎药物提供理论依据。

  1. 实验方法
    1. PMA诱导THP1细胞分化成巨噬细胞

将单核细胞株THP-1细胞接种在含10%胎牛血清、1%谷氨酰胺、1%双抗( 青霉素和链霉素配制)的1640 培养基里37℃、5% CO2、湿度恒定在60%至70%的孵箱内培养。培养状态良好后2至4代用于实验。以每孔5 times; 106接种12孔板，60 mu;g·L-1浓度下PMA诱导巨噬细胞72 小时，用PPS洗涤2次更换培养基培养用于后续实验。

    1. ELISA检测

按照ELISA试剂盒中的说明书进行，简要步骤如下：首先准备一系列稀释的各种细胞因子标准品，取出需要的ELISA反应板，在相应的孔中加l00mu;l稀释的标准品、空白对照及待测样品，室温孵育2 h。甩干孔内液体，每孔加400mu;l洗涤缓冲液，洗板4次。然后每孔加100mu;l 生物素标记的各种细胞因子的单克隆抗体，室温孵育l小时。用洗涤缓冲液洗板四次后每孔加100mu;l HRP标记的亲和素，室温孵育30分钟。洗涤缓冲液洗板。每孔加100mu;l底物工作液，室温孵育15至30分钟。视显色情况每孔加50mu;l终止液，震荡10分钟混匀。在酶标仪上读取吸光度。根据标准品的吸光值得出标准曲线，从而计算样品的浓度。

    1. Western Blot实验
      1. 细胞内总蛋白的提取

每1ml 细胞裂解液加入1mu;l 蛋白酶抑制剂、5mu;l磷酸酶抑制剂和5mu;l PMSF，混匀，冰上保存备用。将诱导贴壁的巨噬细胞弃去培养液，加入适量预冷的PBS缓冲液于培养皿中，轻轻振摇培养皿，弃去PBS缓冲液，洗涤3遍。培养皿中加入适量预冷的细胞裂解缓冲液，用细胞刮子刮下细胞，将细胞及培养皿中的液体转移至离心管中，涡旋震荡10stimes;4次，每两次间隔5 min，充分裂解细胞。最后4℃、13500rpm离心15min。取上清即为总蛋白提取物。

      1. 蛋白定量

按照试剂盒说明书的步骤操作。

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