开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、选题依据及意义
盐酸克伦特罗是"瘦肉精"的一种,临床上常被用于平喘,治疗呼吸系统疾病,而在肉用动物的生产过程中,如果在饲料中添加了瘦肉精,则能起到提高动物生长速率,加快脂肪分解,提高蛋白质合成等作用,从而显著提高瘦肉率,因此,瘦肉精受到很多养殖户的青睐。然而,由于瘦肉精能够引起家畜血管扩张、心率加快和肾脏负担加重等剧烈反应,人们吃到具有残留的肉制品后很可能发生肌肉颤动、腹泻、神经过敏和心跳加速等一系列中毒症状,严重者可能危及生命,因此从1997年开始,我国农业部就严令禁止在饲料中添加盐酸克伦特罗和莱克多巴胺等7种瘦肉精[1],但是,由于利益的驱使,如今仍有部分企业违规添加瘦肉精,导致毒害事件时有发生,因此发展一种准确、有效、快捷的瘦肉精检查方法对保障人民生命财产安全,提高肉制品检疫效率具有重要的现实意义。
目前,瘦肉精的检测主要包括酶联免疫法(ELISA)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(CG-MS)、胶体金快速检测试纸条(GICT)、生物传感技术等方法[2]。但这些方法各有利弊,或需要专业的仪器与复杂的操作流程,耗时费力,不适用于现场检查,或容易出现假阳性的结果,专属性差。
最近的研究表明,金(Au),银(Ag)和铜(Cu)等金属纳米颗粒(NPs)被广泛用于比色测定来源于不同环境的金属离子、生物分子、有毒化学物质、生物和食物样本。这种检测基于NPs在可见光区发生局域表面等离子共振(LSPR)红移而产生的颜色变化。当将目标分析物引入相应的NPs溶液中时,可以观察到AgNPs,AuNPs和CuNP分别从黄色到红色,粉红色到蓝色和红色到黄色的颜色变化,这种剧烈的颜色变化是由于形态转变和表面化学反应引起的贵金属纳米粒子聚集造成的。基于这种机制,已经开发出多种方法来利用贵金属纳米粒子作为比色传感器或探针用于检测金属离子,氨基酸,抗坏血酸,半胱氨酸和谷胱甘肽,药物和核酸等[3-4]。
纳米金粒子被如此广泛的应用于生物领域, 主要因为纳米金粒子的制备方法简单且成熟, 颗粒大小可被严格控制, 颗粒分布比较均匀[5-6]。此前已有应用氧化还原法制备柠檬酸根修饰的金纳米粒子进行瘦肉精检测的例子[7],但其灵敏性和选择性仍有待改善。考虑到对金纳米颗粒进行表面修饰可以改变它的吸收峰、导电率、氧化还原等行为[8],且在低浓度的同聚物和嵌段共聚物之间的位阻效应可有效提高纳米金粒子的稳定性和单分散性,并使其性质趋于稳定[8],因此我们决定对纳米金颗粒进一步修饰,进而提高检测选择性。由于GNPs 表面易与含巯基、氨基、氰基官能团的化合物特异性结合[10] ,而姚国平等[11]合成的巯基苯硼酸修饰的纳米金粒子已被用于标准糖蛋白样品的富集, 它对糖肽的选择性富集能力已经得到了验证,因此本课题我们拟用4-巯基苯硼酸对AuNPs进行修饰。
为达到快速,简便,适用于现场测定和实时测定的目的,我们拟用比色法的原理对盐酸克伦特罗进行检验,纳米金比色法操作简单, 反应速度快, 近十年来围绕纳米金开发了各种各样的比色检测方法, 被广泛用于分析细胞、蛋白质、DNA、金属离子、小分子等[12]。
二、研究目标与主要内容
1、研究目标:
合成制备4-巯基苯硼酸修饰的纳米金,利用比色法的原理,应用于盐酸克伦特罗的检验,在实验过程中优化检验条件,寻求最优方案,致力于开发出一种快速,简便,适用于现场测定和实时测定的瘦肉精检测方法。
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