PDL-1拮抗肽的筛选和研究文献综述

 2023-02-12 08:02

1.拟研究或解决的问题本课题旨在寻找与PD-L1特异性结合的靶向肽，并通过生物信息学模拟其与PD-L1的结合位点，探究其阻断PD-1/PD-L1信号通路的能力，为深入研究将短肽类作为阻断PD-1/PD-L1信号通路抗肿瘤的途径、机制和应用前景等提供更可靠的信息。

2．研究方案2.1以PD-L1蛋白为靶蛋白进行筛选以NEW ENGLAND 公司的Ph.D.-12噬菌体展示文库为筛选文库，将目的蛋白PD-L1包被后以BSA封闭，加入文库进行吸附-洗脱-扩增的经典生物淘洗后，获得与靶蛋白结合的噬菌体克隆，采用蓝板筛选法测定噬菌体滴度，ELISA法测定噬菌体与靶分子的亲和力，对获得的高亲和力噬菌体进行DNA提取，测定插入的外源DNA序列，得到一系列多肽序列，这些序列即为潜在的靶向肽。

2.2 靶向PD-L1蛋白的一系列噬菌体克隆的初步验证与生物信息学分析将经筛选获得的一系列噬菌体克隆对其对应的靶蛋白PD-L1进行多克隆、单克隆ELISA实验，挑选出具有高亲和性的克隆，处理后测序，获得潜在的靶向肽序列。

同时，通过生物信息学的药物辅助设计对已筛选到的噬菌体肽进行分析，模拟其与PD-L1的结合位点，以获得潜在的具有阻断PD-1/PD-L1信号通路功能的噬菌体肽。

2.3 潜在靶向肽的合成与体外验证。

通过固相合成法合成该靶向肽，验证其生物学功能。

一方面通过体外实验，如ELISA 检测其与靶蛋白的亲和能力；同时构建PD-L1的稳转细胞株，通过细胞免疫荧光实验及流式细胞术验证靶向肽对细胞表达的PD-L1的特异性结合能力，探究其阻断肿瘤细胞通过PD-1/PD-L1逃逸免疫监控的能力。

通过混合细胞淋巴反应研究多肽是否可以促进T淋巴细胞的增殖以及上调相关细胞因子如IFN-gamma;，IL-2。

2.4预期达到的目标掌握噬菌体筛选技术，进行噬菌体对细胞的筛选，并进行初步鉴定，进行噬菌体对PD-L1的筛选，并进行初步鉴定，对筛选结果进行体外实验验证其特异性，分析结果并撰写文章3文献综述 3.1PD-L13.1.1PD-L1的结构程序性死亡配体-1（PD-L1）也被称作CD274或B7-H1，是一种在人体内由CD274基因编码的蛋白质[1]。

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