天然产物LT改善PM2.5诱导实验肺损伤的作用研究文献综述

 2023-02-07 03:02

一、拟研究或解决的问题在从抗炎免疫调节角度出发,探究天然产物LT对PM2.5诱导急性肺损伤的保护作用。

二、研究手段 C57BL/6J小鼠每天灌胃生理盐水或天然产物LT,持续14天;同时,在第12、13和14天灌胃结束1h后,采用非暴露式气管滴注法,将生理盐水或PM2.5混悬液气管滴注入小鼠肺内。

在最后一次造模结束后的24h,处死小鼠,解剖取肺组织进行组织病理切片观察、qRT-PCR、Western Blot等分析,比较空白对照组、PM2.5模型组、天然产物LT给药组之间的结果差异。

综合分析以上结果,阐明PM2.5和天然产物LT对小鼠的肺损伤作用机制。

2.1 仪器和试剂TH-150F中流量大气采集器(武汉天鸿仪器有限公司),超声波清洗器,冷冻干燥机,高速离心机;静脉留置针(20G),动物手术刀和手术镊,真空采血管;-80℃超低温冰箱,动物组织切片机,激光共聚焦显微镜,电泳仪,Nano-100超微量分光光度计,Eppendorf Mastercycler nexus GSX1梯度PCR仪,QuantStudio 3 Real-Time qPCR仪等。

PM2.5固体粉末,天然产物LT;RNA提取试剂TRIzol Reagent,逆转录试剂盒PrimerScript RT Master Mix,聚合酶链反应(PCR)引物,SYBRPremix Ex TaqII荧光染料;BCA蛋白测定试剂盒,炎症相关抗体;超纯水,0.9%生理盐水,4%水合氯醛,4%聚合甲醛,75%酒精等。

2.2 PM2.5样品的采集和制备使用中流量大气采集器收集PM2.5,采样流速为0.1m3/min。

PM2.5的采集地点位于南京市中国药科大学实验楼的高楼层处,收集时期为2020年9~11月,更换新玻璃纤维滤膜的周期为24h。

将收集好的滤膜用消毒后的手术剪裁成12-3cm的条状,浸入去离子水,低温超声振荡20min,重复提取四次,用8层灭菌纱布滤过,滤液冷冻干燥24h,置于-80℃超低温冰箱中避光保存。

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