五步蛇蛇毒蛋白的分离与纯化文献综述

 2022-12-30 03:12

【课题拟研究的问题】

五步蛇蛇毒的主要成分为蛇毒类凝血酶、纤溶酶、活性肽、细胞毒素和神经毒素等。五步蛇蛇毒中主要引起凝血障碍的组分大多是蛋白质，且这些物质可有效应用于治疗血液疾病如血栓等。蛇毒蛋白组分的分离纯化工作近年来已取得长足的进步,采用先进的层析分离手段,使得不少蛇毒蛋白组分得到了纯化。但是国内对蛇毒蛋白的分离没有有效且比较优化的方法并且所使用的技术纯化效果不佳，重复性差。目前国内对蛇毒蛋白质成分的研究多是单一酶的研究,其他的有效成分被浪费,以至于蛇毒利用率较低,产品成本高。

本研究课题主要目的是研究如何系统地将蛇毒中所含有的蛋白质成分通过SephadexG-75凝胶及DEAE-SphadexA-50和CM SephadexC-50或者HPLC分离出来并进行纯化，得到单一组分，可利用SDS-PAGE凝胶电泳或HPLC验证分离的效果。分离纯化后所得到的单体成分可以方便地去做药理药效的研究且可应用于临床研究，充分利用蛇毒这种宝贵的生物资源,可以有效提高产品的产量以及降低生产使用成本,使其更广泛有效的应用于临床治疗。

【采用的研究手段及实验进度】

研究手段

本实验拟采用SephadexG-75凝胶柱及DEAE-SephadexA-50层析柱进行分离，目标主要将各个蛋白分离然后通过SDS-PAGE凝胶电泳验证分离的效果，最后通过HPLC进行验证纯度以及分离效果。

1.样品的处理

称取蛇毒样品300mg溶于洗脱液中，充分震荡摇匀，置于4℃冰箱中静置过夜，放入高速离心机，12000r/min、4℃，离心15min，取上清液作为上样样品，置于4℃冰箱中保存备用。

2. SephadexG-75凝胶

SephadexG-75凝胶活化，装柱，上样，调整流速，进行洗脱，每6min收集一管，收集50管。

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