2-酰胺吩嗪衍生物抗肿瘤活性初步研究文献综述

 2022-12-29 14:18:17

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

一、拟研究或解决的问题

实验室前期合成一系列针对抑制TrxR酶活性的2-酰胺吩嗪衍生物，本项目拟在细胞水平上对这些化合物进行抗肿瘤活性筛选，并测定它们的TrxR酶抑制的活力，初步探索其作用机制，发现活性较好的2-酰胺吩嗪衍生物，为药物开发提供活性分子。

二、采用的研究手段

1.采用MTT、WB和硫氧还蛋白还原酶(TrxR)酶活检测法考察2-酰胺吩嗪衍生物对癌细胞活性的抑制作用及活性比对；

2.MTT检测法是检测细胞活力的实验方法，检测细胞的增殖情况以及规定时间内不同药物浓度下细胞的存活率，间接反映活细胞数量；WB法检测被特异性抗体识别的抗原（通常是蛋白质）考察不同2-酰胺吩嗪衍生物对癌细胞的抑制作用；

3.硫氧还蛋白还原酶(TrxR)活性检测，是一种新型的肿瘤标志物检测，其在体内的表达和活性水平在一定程度上反应了体内细胞的异常增生程度。

三、实验方案

1.通过MTT法检测不同2-酰胺吩嗪衍生物对四个癌细胞生存能力的影响(人类肝癌细胞系(HepG2),肺腺癌细胞系(A549),人类乳腺癌细胞系(MCF7)和人类结肠癌细胞系(HCT116)),以及人类正常肝细胞(L02)和人类脐静脉内皮细胞(HUVEC)非癌症细胞系,分别使用羟基喜树碱、顺铂作为参考药物[1][2]。

用2-酰胺吩嗪衍生物在用96孔板中的 (0-50 uM) 浓度将细胞(4*104 per well)处理48小时，用MTT法分析细胞活力。将MTT (20 mL, 5 mg/mL)加入到每个孔中，在5%的37°C 的CO2中保持4h，每个样品的光密度(OD)记录在570 nm处的自动读版器上

  1. 使用激光扫描共聚焦显微镜来检测2-酰胺吩嗪衍生物在癌细胞中的位置。将活癌细胞分别与2-酰胺吩嗪衍生物（0，5，10 uM）、有丝分裂跟踪器红CMXROS（0.1 uM）在培养基中孵育30分钟[3][4]。
  2. 使用MitoSOXTM红色线粒体超氧化物指示剂(M36008, ThermoFisher Scientific)测定癌细胞的总ROS水平。MitoSOXTM红色试剂一旦进入线粒体，就很容易被超氧化物氧化，氧化产物与核酸结合后变成高荧光。该试剂盒鉴定了ROS（-）和ROS（ ）两种不同的细胞群。用荧光活化细胞分选（FACS）口径流式细胞仪测定细胞总数百分比。
  3. 使用荧光激活细胞分选仪(FACS)，通过碘化丙啶染色，研究了2-酰胺吩嗪衍生物对癌细胞的细胞进程的影响。通过WB检测细胞周期蛋白B、细胞周期蛋白D、细胞周期蛋白E、CDK1、CDK2、p21、p53等相关蛋白表达水平的变化推断影响的是哪一部分的进程。
  4. 为了进一步检测2-酰胺吩嗪衍生物是否会导致癌细胞凋亡，先做转录组学看看哪些基因的转录有明显变动，从而初步判断从哪个凋亡通路入手,再用2-酰胺吩嗪衍生物对癌细胞的细胞裂解物进行WB分析。
  5. 用硫氧还蛋白还原酶(TrxR)活性检测分析在何种2-酰胺吩嗪衍生物浓度下2-酰胺吩嗪衍生物对硫氧还蛋白还原酶(TrxR)的抑制活性最大。TrxR可以催化还原5，5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)分子中二硫键，使其还原为两分子的黄色产物5-巯基-2-硝基苯甲酸(TNB)，产物在405~412 nm处有强烈的紫外吸收，可通过检测TrxR单位时间内催化DTNB的量来反映该酶活性。但生物样本(如血液，组织匀浆)的复杂体系中，很多其他生物活性物质可以将DTNB还原。因此，对于复杂样品中TrxR活性的测定，通常采用特异性TrxR抑制剂抑制该酶活性，然后通过背景扣除法测定生物样本中TrxR的活性。测定程序分为两步骤：DTNB直接测定样品中总催化活性；用特异性TrxR抑制剂掩蔽TrxR催化活性后，用DTNB测定样品中剩余催化活性。然后两者测定的差值即反映了TrxR特异性催化活性。[5]

四．Trx／TrxR影响肿瘤抗氧化能力及Trx系统与肿瘤相关信号通路的交互作用

剩余内容已隐藏，您需要先支付 10元 才能查看该篇文章全部内容！立即支付

发小红书推广免费获取该资料资格。点击链接进入获取推广文案即可： Ai一键组稿 | 降AI率 | 降重复率 | 论文一键排版

您可能感兴趣的文章