DL-4对大鼠体外给药后血小板功能的影响文献综述

 2022-12-28 09:34:00

开题报告内容;（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000 字

一、开题报告

本次毕业设计的目的是探究药物DL-4对大鼠血小板功能的影响，说明药物的抗血小板作用。实验过程中需掌握血小板血浆提取方法、血小板的黏附实验方法及相关试剂盒的应用。

【课题意义及背景】

抗血小板药物在预防各种临床条件下的心血管事件方面有着非常重要的地位，抗血小板治疗可将严重心血管事件的风险降低约25%，抗血小板药物在继发性预防心血管事件随机临床试验一直证明显著降低急性心肌梗死的风险梗塞（AMI）、心血管死亡、中风和其他重要的预后指标。但由于抗血小板药物治疗后有一些不良事件的发生如使用阿阿司匹林后的胃肠道出血情况，高血糖的病人使用氯吡格雷治疗后有很大的概率血小板呈反弹性高反应活性等。因此相关抗血小板药物的进一步研究和探讨其作用通路是有意义的。

【研究方案】

（1）DL-4对胶原诱导大鼠体外血小板粘附的抑制作用

在96孔细胞培养板内加入100 mu;l纤维蛋白原溶液（20 mu;g/ml）于4℃包被过夜。在粘附实验开始前，仔细吸出纤维蛋白原溶液，每孔使用Tyrodersquo;s缓冲液清洗两遍，然后每孔加入100 mu;l含1% BSA的缓冲液于37℃孵育1 h，以消除非特异性粘附配体。最后再使用Tyrodersquo;s缓冲液清洗两遍。按标准方法进行血小板分离。大鼠，分离右侧颈动脉插管取血（3.8%的枸橼酸钠，1：9抗凝）。800 rpm离心10 min，取上层乳白色混悬液即为富血小板血浆（PRP）。PRP以3000 rpm离心5 min，弃上清，得血小板沉淀，用无Ca2 的Hepes-Tyrodersquo;s缓冲液清洗1次后，3000 rpm离心5 min，弃上清，用无Ca2 的Hepes-Tyrodersquo;s缓冲液重悬血小板。

设定6个试验组组，分别为空白对照组、胶原诱导的模型对照组、DL-4（10-4 M、3*10-5 M、10-5 M）三个浓度组、奥扎格雷（3*10-5 M）浓度组。血小板悬液与TSL-0202（10-4 M、3*10-5 M、10-5 M）三个浓度组、奥扎格雷（3*10-5 M）浓度组于37℃孵育15 min，各对照组加入等体积的Hepes-Tyrodersquo;s缓冲液孵育至相应时间；孵育结束后，在已包被好的96孔细胞培养板中分别加入50 mu;l（2times;108个/ml）血小板悬液，于37℃粘附反应60 min；胶原粘附实验的终浓度为2 mu;M。粘附反应结束后，每孔加入200 mu;l Hepes-Tyrodersquo;s缓冲液清洗未粘附的血小板。清洗完之后每孔加入140 mu;l的酸性磷酸酶底物溶液，在室温下反应1 h后，在加入100 mu;l 2 M NaOH终止反应并显色。反应产物使用酶标仪与405 nm读取吸光度。

血小板粘附率计算公式为=（给药组-空白值）/（总血小板-空白值）times;100%

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