一、实验背景
蔗糖酶（Sucrase，EC3.2.1.26）又称转化酶（invertase）或beta;-D-呋喃果糖苷酶（beta;-D-fructofuranosidase），在六大蛋白酶类中属于水解酶类，作用于糖基，水解氧—糖化合物。蔗糖在蔗糖酶的作用下，水解生成D-葡萄糖和D-果糖。蔗糖酶水解由葡萄糖和果糖所形成的beta;-1，2糖苷键。蔗糖酶具有键的相对专一性，还可以催化棉子糖水解生成蜜二糖和果糖，但对蔗糖的亲和力最大。蔗糖酶广泛存在于植物、动物和微生物细胞中，蔗糖酶在植物的运输贮藏、生物体的糖类代谢和生长发育都具有重要的意义，并在渗透调节、抗逆性生长繁殖、以及信号传导方面也发挥着重要的作用。
二、实验目的和意义
酶的动力学性质分析, 是酶学研究的重要方面。本实验从酵母中分离纯化出酵母蔗糖酶，通过一系列实验探究pH、温度、金属离子对蔗糖酶的活性影响机制，找到最适温度、最适 pH, 米氏常数( Km) 等，为酵母蔗糖酶在食品工业中的应用和蔗糖酶基因工程产品的下游技术开发, 提供了实验依据。
三、实验内容
1、SDS 抽提法
称取酵母10g ,加入60 mL 0.3 mmol/L 的SDS（十二烷基磺酸钠）溶解, 40℃水浴12 h后取出, 4℃、12000 r /min 离心15 min ,取上清液即为粗制酶液, 4℃保存。
2、乙醇分级沉淀
（1）粗制酶液中加入乙醇使其质量分数达30 % ,4℃放置过夜, 4℃ 12000 r/min 离心15 min ,取上清液, 再追加乙醇使其终质量分数达50 %。 4℃放置 1 h , 4℃、12000 r/min 离心 15 min ,弃上清液,沉淀用双蒸水溶解, 4℃保存。
（2）将上述经SDS抽提法提取,质量分数50 %的乙醇沉淀所得的酶液用透析液(pH 7.3、0.05 mol/L TrisHCl 缓冲液)充分透析 ,所得透析液 4℃保存。
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