DSS诱导的急性肠炎模型中28号化合物的作用文献综述

 2022-12-12 19:03:08

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

背景:

DSS（硫酸葡聚糖）诱导急性肠炎模型是让小鼠口服2.5%的DSS溶液7d后出现体重减轻、腹泻、血便等急性肠炎的表现。DSS诱导肠炎的小鼠模型的建立方法使动物的死亡率降低为零，但病理表现相同，从而使模型变得稳定而可靠，并具有可重复性。NLRP3 炎症小体是一种蛋白复合体，属于核苷酸结合寡聚域样受体（nucleotide-binding oligomerization domain like receptor，NLR）家族的成员，研究认为NLRP3 炎症小体在炎症性疾病中能发挥重要作用。2010年，Bauer等人提出NLRP3炎症小体是治疗炎性肠病的重要靶点。NF-E2相关因子2（Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2）是细胞调节抗氧化应激反应的重要转录因子，Nrf2/ARE 是近年新发现的机体抵抗内外界氧化和化学等刺激的防御性转导通路。除了保护细胞抵抗氧化应激，亲电子攻击以外，最近研究表明Nrf2 可以抵抗炎症刺激，抑制细胞、组织受到炎症损伤。28号化合物是新发现的化合物，研究表明28号化合物是Nrf2的激动剂,它能通过激活Nrf2/ARE信号通路来保护细胞抵抗外界氧化和化学刺激。

研究方法：

  1. HE染色

即苏木精-伊红染色。苏木精染液为碱性,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色 ；伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。病理学切片HE染色若发现小鼠病变结肠腺体结构紊乱,黏膜和黏膜下单核细胞和多核细胞浸润,即为DSS诱导的小鼠急性肠炎模型造模成功。

  1. 髓过氧化物酶活力测定

　　中性白细胞中存在有髓过氧化物酶，每个细胞所含的酶的量是一定的，约占细胞干重的5%，该酶具有使过氧化氢还原的能力，利用这一特点可以分析酶的活力，并定量测定中性白细胞的数目。通过供氢体邻连茴香胺供氢后生成黄色化合物，在460nm处通过比色测定此产物的生成量，从而推算出MPO的活力。取组织100mg 加 0.5％CTAB溶液1ml，用玻璃匀浆器制备匀浆，冻融（－80°C/37°C)三次，于4°C以14000g 离心15分钟。取0.1ml上清加反应液（盐酸邻联茴香胺16.7mg，50mmol/L PBS 10ml，蒸馏水90ml，加30％过氧化氢，使终浓度为0.0005％）2.9ml。保持温度25°C，立即置分光光度计在460mm波长下进行2分钟时间扫描。以第30秒到第90秒的1分钟内吸光度的变化代表酶活力的改变。1单位MPO活力以25°C时分解1mmol 过氧化氢来表示。

3.ELISA

称取组织适量，冰上匀浆，离心后收集上清，严格按照Elisa 试剂盒进行，以空白调零，450 nm 波长依次检测各孔光密度D( lambda;) 值。

4.组织免疫组化

组织固定，常规脱水，冰冻切片,烤片，脱蜡，水化; 3%H2O2消除过氧化氢酶，10%山羊血清封闭, PBST 洗涤，画圈，滴加一抗，4 ℃ 冰箱过夜，PBST 洗涤，滴加二抗，37 ℃孵育，DAB 显色，苏木素复染; 梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，拍照。

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