麦冬皂苷D39对缺氧诱导内皮细胞表达组织因子的作用研究文献综述

 2022-12-09 14:51:53

拟研究或解决的问题：

静脉血栓包括深静脉血栓和肺栓塞，是继心肌梗死和中风之后的第三大常见的心血管疾病，具有较高的发病率和死亡率。静脉血栓形成的三大病因，即静脉血流滞缓，静脉壁损伤和血液高凝状态，在临床上犹以血液瘀滞最为常见，血流瘀滞会导致静脉瓣处出现促凝物质的聚集以及局部缺氧的现象。内皮细胞是参与血栓病理形成过程中重要细胞之一，在血栓与止血方面具有一定的作用。研究发现，血流瘀滞相关的慢性缺氧或间接性缺氧可促进内皮细胞的活化，转变为内皮功能紊乱，大量表达包括组织因子在内的促栓因子，从而导致静脉血栓的形成。

课题组前期利用下腔静脉结扎模型探讨了麦冬皂苷D39的体内药效，发现D39对内皮细胞组织因子表达及静脉血栓形成有一个很好的抑制作用，本课题拟从体外研究的角度考察麦冬皂苷D39对缺氧诱导内皮细胞表达组织因子的干预作用，并初步探讨可能的作用机制，为阐述中药麦冬及麦冬皂苷D39抗静脉血栓形成的药效机制提供进一步的实验依据。

采用的研究手段：

（1）MTT法检测麦冬皂苷D39细胞毒性

HUVECs细胞以7000 cell/孔的细胞密度接种于96孔板中，37 ℃、5% CO2培养24 h。D39（0.01,0.1,1,10,50mu;M)预给药1h，缺氧4h,弃去培养基，加入0.5 mg/mL MTT工作液，37 C，5% CO2孵育3 h；除去培养液，每孔加入用150 mu;L DMSO溶解结晶，振荡10 min，双波长测定OD值(测定波长570 nm，参比波长650 nm)。

（2）Western法测定TF的表达

HUVECs细胞以4times;105 cell/mL的细胞密度接种于60 mm dish中，37 ℃、5% CO2培养24 h。1640培养基同化1 h后，D39 (0.01、0.1、1 mu;M)预处理HUVECs细胞1 h后，缺氧条件下作用4 h。PBS洗涤2次，等量加入细胞裂解液后，提取HUVECs细胞蛋白，4 ℃裂解30 min。离心收集上清液。用BCA蛋白试剂盒测定蛋白含量。剩余的裂解液按1/5的体积加入6times;loading buffer煮沸5 min。10% SDS–PAGE分离样品蛋白并转移到PVDF膜，膜由3%牛血清白蛋白(BSA)封闭并孵育相应的一抗，4 ℃过夜。室温孵育相应的二抗2 h。由化学发光系统(ECLplus, Amersham)检测蛋白条带。

（3）免疫荧光法观察TF的表达

HUVECs细胞以1.5times;104 cell/mL的细胞密度接种于24孔板（含有玻璃片）中，37 ℃、5% CO2培养24 h。1640培养基同化1 h后，加入D39在缺氧条件下孵育4 h后，将培养基吸去，用PBS洗3次，5 min/次；加入4%多聚甲醛，室温放置30 min；吸出固定液，用PBS洗3次，5min/次；加入5% BSA封闭液，室温放置30 min，吸出封闭液，用PBS洗3次，5 min/次；加入TF一抗（1:200，abcam，用5% BSA配制），4 ℃孵育过夜；加入FITC标记的山羊抗兔的二抗IgG（1:400，用PBS配制)，室温避光孵育1 h，用PBS洗3次，5 min/次，加入DAPI染色液，室温避光5min, 用PBS洗3次，5 min/次，加入抗荧光猝灭封片剂；荧光显微镜下观察。

剩余内容已隐藏，您需要先支付 10元 才能查看该篇文章全部内容！立即支付

发小红书推广免费获取该资料资格。点击链接进入获取推广文案即可： Ai一键组稿 | 降AI率 | 降重复率 | 论文一键排版

您可能感兴趣的文章