基于LC-MS/MS的大鼠体内药物代谢酶的绝对定量方法研究文献综述

 2022-12-08 16:14:53
  1. 课题背景

五味子是我国传统中药，应用历史悠久。五味子为木兰科五味子属和南五味子属植物的总称，始载于《神农本草经》，被列为上品。中华人民共和国药典（2010）收录有两种五味子药材，分别为北五味子（Schisandra chinensis (Turcz) Baill）和南五味子（Schisandra Sphenanthera）的成熟果实。北五味子又名五味子，主产于东北，内蒙古等地，其药用成分高、疗效显著而著称，优于南五味子。五味子有效成分主要包括木脂素、多糖，挥发油、有机酸、脂肪油、氨基酸、色素、靴质等多种成分。目前为止，共分离鉴定出200余个化合物，其中含量较高、研究较多、较深入且应用较广泛的主要成分为木脂素，约150多种，其次为多糖和挥发油。

五味子的药理作用涉及中枢神经系统、心血管系统、消化系统、生殖系统以及泌尿系统等各个方面，能敛肺生津，补肾养心，收敛固涩；用于久嗽虚喘，津亏口渴，自汗盗汗，梦遗滑精，遗尿尿频，久泻久痢，失眠健忘，心悸怔忡等症。现代研究发现，五味子对实验动物的肝脏有保护作用，并能够改善实验动物的睡眠情况。

五味子有着重要的药用及保健价值，其生药以及制剂在国内有着大量的市场需求，其中“五酯胶囊”被广泛应用于肝炎的治疗，国外如日本、韩国、俄罗斯则作为滋补品使用。

以往对代谢酶的定量通常使用的是Western Blot，而该方法为相对定量且需要特异性的抗原才能实现。LC—MS/MS技术则改进了这一现状，其能绝对定量蛋白质且不需要抗原，并且结合了液相色谱的高分离能力和质谱提供结构信息的功能，具有灵敏度高、选择性强的优势，尤其是串联质谱( MS/MS 或 MSn) 技术的应用，可以获得丰富、有效的化合物结构信息，进而建立快速、高效的分析研究体系。对于体内代谢酶的分析，LC －MS/MS 技术可以提供更好的分离能力，降低分析物的检测限，并提高分析速度，从而可实现体内复杂样品的快速、高通量分析。

本课题拟建立基于LC-MS/MS的大鼠体内药物代谢酶的绝对定量方法。包括肝微粒的制备，肽段的筛选，同位素内标的确定，方法学的验证等。同时将该方法应用于考察对乙酰氨基酚造成的肝损伤对大鼠体内药物代谢酶表达的影响，为揭示由对乙酰氨基酚引起的肝损伤的机制提供参考。此外，以五味子为模型药，考察五味子药物代谢酶的调节作用。

二、研究目标

（1）通过考察大鼠灌胃给予对乙酰氨基酚后对体内药物代谢酶表达的影响。

（2）考察五味子对大鼠肝中药物代谢酶的调节作用。

（3）应用LC-MS/MS技术对大鼠体内药物代谢酶进行绝对定量。

三、课题关键问题及难点

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