- 实验背景
2018年7月2日，以色列Compugen公司宣布其针对PVRIG的治疗性抗体COM701获FDA批准进入临床试验。COM701是全球首个获批进入临床的针对PVRIG的抗体，目前用于恶性实体瘤的治疗。人PVRIG（与脊髓灰质炎病毒受体相关的免疫球蛋白结构域蛋白）也称为CD112受体（CD112R），是脊髓灰质炎病毒受体样蛋白（PVR）家族中大约34 kDa的单个跨膜蛋白。CD112R基因编码一个推定的跨膜蛋白，该蛋白由单个细胞外IgV结构域，一个跨膜结构域和一个较长的细胞内结构域组成。CD112R在T-和nk细胞亚群中表达，在肿瘤微环境中的淋巴细胞中特别高表达，可以充当抑制T细胞受体介导的信号的共抑制受体，是一种抑制性免疫检查点。CD112(PVRL2)被鉴定为PVRIG的配体，放置在t细胞的免疫调节TIGIT/DNAM信号轴上。PVRL2的表达分析表明，它在许多癌症指征中均高表达，包括乳腺、卵巢和子宫内膜肿瘤，提示PVRIG/PVRL2信号通路可能是这些患者群体免疫抑制的主导机制，并且anti-CD112R联合PD-1或TIGIT抑制剂治疗T细胞进一步增加了T细胞的活化。
由君实生物医药科技有限公司开发研制的JS009注射液，其作用机理就是通过与PVRIG特异性结合，阻断PVRIG和其配体PVRL2的作用，同时能够增加CD4 T细胞的增殖，增加CD8 T细胞IFN-gamma;的分泌，提高了临床治疗的效果。
本实验分别通过结合ELISA和配体竞争抑制ELISA的方法对JS009注射液进行生物学活性检测。
- 实验目的和意义
- 结合ELISA法
该实验的目的是建立JS009注射液的结合ELISA测定方法，通过对不同条件下结合ELISA检测结果的分析并相应进行优化，获得最佳的实验条件。
2.配体竞争抑制ELISA法
该实验的目的是建立JS009注射液的配体竞争抑制ELISA测定方法，通过对不同条件下配体竞争抑制ELISA检测结果的分析并进行相应优化，获得最佳的实验条件。
- 实验原理
ELISA是将抗原和抗体的特异性免疫反应与酶的催化反应相结合而建立的一种免疫检测技术。使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性，然后与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。
- 结合ELISA法
JS009注射液能够特异性的与HX1 hCD112R Fc结合，本实验通过考察JS009注射液与HX1 hCD112R Fc结合的能力（EC50）来表征其生物学活性。
2.配体竞争抑制ELISA法
JS009注射液能够与PVRL2竞争结合CD112R，本实验通过考察JS009注射液与PVRL2竞争结合CD112R的能力（IC50）来表征其生物学活性。
