开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、研究背景与意义
多发性骨髓瘤Multiple Myeloma（MM）是美国和欧洲第二常见的血液系统恶性肿瘤（侵袭性肿瘤），B-cell maturation antigen（BCMA）是一种含有184个氨基酸的非糖基化的跨膜糖蛋白和非酪氨酸激酶受体，属于肿瘤坏死因子超家族（TNFRSF17），主要表达在成熟B细胞和浆细胞膜表面。经多种方法证实，BCMA在MM细胞上表达，且在恶性浆细胞上的表达量明显高于正常的浆细胞。BCMA的发现，为多发性骨髓瘤的治疗带来了一个新的潜在靶点。同时也有研究发现在多发性骨髓瘤细胞存在免疫抑制的微环境，促进肿瘤的生长。
程序性死亡受体1（PD-1），广泛表达于免疫细胞，是一种重要的免疫抑制分子。PD-1主要通过与其在肿瘤细胞上表达的配体PD-L1结合，从而抑制免疫系统，造成免疫逃逸。
本课题主要通过构建同时靶向BCMA与PD-1双特异性抗体DF00的表达载体，并进行蛋白的表达及纯化，获得同时靶向于BCMA与PD-1的双特异性抗体DF00，同时在体外初步验证其靶向亲和力，为探讨DF00与肿瘤免疫的关系奠定基础。
二、研究方法
利用分子生物学软件设计引物并通过PCR，overlap PCR技术构建完成双抗DF00，经过测序鉴定的四个重组质粒通过瞬时转染HEK 293细胞进行表达，利用亲和层析的Protein A柱分离纯化双抗，通过SDS-PAGE，western blot检测目的蛋白的表达。最后通过ELISA，流式验证其靶向性。
- 参考文献
1. Anja Seckinger, J.A.D., Samuel Moser, ..., Dirk Hose, Bruno Paiva, Minh Diem Vu, Target Expression, Generation, Preclinical Activity, and Pharmacokinetics of the BCMA-T Cell Bispecific Antibody EM801 for Multiple Myeloma Treatment. Cancer cell, 2017.
2. Oden, F., et al., Potent anti-tumor response by targeting B cell maturation antigen (BCMA) in a mouse model of multiple myeloma. Molecular Oncology, 2015. 9(7): p. 1348-1358.
3. Hipp, S., et al., A novel BCMA/CD3 bispecific T-cell engager for the treatment of multiple myeloma induces selective lysis in vitro and in vivo. Leukemia, 2017. 31(8): p. 1743-1751.
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