一、课题的研究背景、意义和目的
双硫仑(disulfiram, DSF)，又名四乙基二硫化秋兰姆，于1951年获得美国食品和药物管理局(FDA)的批准，作为戒酒药使用，具有价格廉价及毒副反应低的特点。大量研究表明，双硫仑是一种二价过渡金属离子螯合剂，当DSF联合二价铜离子、锌离子、铬离子等金属离子时，抑制肿瘤效果尤为显著。由于DSF作为药品使用已有60多年历史，安全性可靠，有望在肿瘤治疗中发挥着重要的作用。
乳腺癌是全世界第二常见的癌症，是女性最常见的恶性肿瘤之一。在我国，乳腺癌每年新发病例约21万，居女性恶性肿瘤之首，且近年来发病率呈逐年上升趋势。三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)指雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、人类表皮细胞生长因子受体-2(human epidermal growth factor,HER2)均不表达的一种乳腺癌亚型，由于缺乏有效受体靶点，目前还没有特效治疗药物，并且患者发病年龄较轻、恶性程度高、侵袭性强，容易出现局部复发和远处转移，患者总体生存期短。有研究表明DSF与铜(Cu)联合，能选择性地抑制乳腺癌细胞的蛋白酶体活性从而诱导细胞凋亡，对正常或永生化的乳腺癌细胞中的蛋白酶体没有抑制作用。也有研究指出，DSF/Cu能抑制乳腺癌细胞系的NF-kappa;B活性，从而引起细胞凋亡，提示DSF-Cu可能是通过刺激活性氧( reactive oxygen species，ROS)的产生并抑制ROS-NF-kappa;B信号通路而产生凋亡诱导效应的。
但DSF的抗肿瘤机制尚未完全明确，我们推测其良好的抗肿瘤效果可能有内源性天然免疫成分参与，而环磷酸鸟苷-腺苷合成酶(cyclic GMP-AMP synthase ,cGAS)-干扰素激活基因(stimulator of interferon genes ,STING)通路在抗肿瘤免疫中起着至关重要的作用。作为胞质中的DNA感受器,cGAS能够识别细胞质内的异常DNA，激活STING信号通路，介导下游的干扰素相关基因、炎性相关因子和趋化因子的产生，从而启动机体的免疫应答。本课题利用Western Blotting实验来检测DSF与Cu2 联用对人乳腺癌细胞MDA-MB-231中cGAS-STING通路的影响，探讨DSF/Cu在TNBC疾病治疗过程中可能的作用机制，为后续进一步拓宽乳腺癌的治疗手段提供理论依据。
- 课题研究的主要内容
Western Blotting检测DSF与Cu2 联用对人乳腺癌细胞MDA-MB-231中cGAS-STING通路是否激活，检测指标包括的TBK1、p-TBK1、STING、p-STING、IRF3、p-IRF3、beta-actin等蛋白。
- 研究难点
- 酶标仪、转膜仪、电泳仪等仪器的使用
- 细胞实验、蛋白提取实验、免疫印迹实验的操作及数据的处理
- 工作计划
2月28日—3月20日：完成文献查阅、开题报告等前期工作。
3月21日—5月10日：完成实验工作。主要包括：细胞复苏、传代、铺板、给药；细胞蛋白的提取、BCA法测量蛋白浓度、制样；SDS-PAGE、蛋白质转移、免疫印迹分析等
5月11日—5月20日：完成毕业论文的撰写工作。
5月21日—6月04日：完成毕业论文的评阅、答辩与修改工作。
6月05日后：完成毕业论文的校对、归档等工作。
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