羟丙甲纤维素空心胶囊微生物限度检查文献综述

课题性质

基础研究 radic;应用课题 设计型 调研综述 理论研究

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

一、拟解决的问题

1.对羟丙甲纤维素空心胶囊进行微生物限度检查。

2.根据样品空心胶囊的特点，采用常规法考察细菌计数回收率、霉菌、酵母菌计数回收率，以及考察控制菌检查，并对其进行方法学验证。

二、研究的方法

1.实验试剂及仪器：

羟丙甲纤维素空心胶囊；

营养琼脂培养基；改良马丁培养基；玫瑰红钠琼脂；胆盐乳糖增菌液；4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基；溴化十六烷基三甲基铵琼脂培养基；

大肠埃希菌；金黄色葡萄球菌；枯草芽胞杆菌；白色念珠菌；黑曲霉；

电子天平；高压灭菌锅；隔水式恒温培养箱；台式干燥箱；恒温水浴；旋涡混合仪；万级空气净化间；百级超净工作台；台式离心机；紫外检测仪；麦氏比浊管等

2.实验方法及过程

供试品溶液的制备

菌悬液制备：分别接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌的新鲜斜面菌种至5ml营养肉汤培养基，35℃培养24小时；白色念珠菌的新鲜斜面菌种至5ml改良马丁培养基，25℃培养箱培养48小时；取出后上述培养液3000rpm离心10分钟，倾出上清液，加入灭菌生理盐水10ml，用麦氏比浊管比浊确定浓度，适当稀释至约50~100CFU/ml。接种黑曲霉的新鲜菌种至改良马丁琼脂斜面，25℃培养7天，使产生孢子。加入5ml 灭菌生理盐水，用接种环将菌苔刮下，振摇后倾出菌液。用管口蒙有两层灭菌纱布的无菌毛细吸管吸取菌液加入无菌试管中。3000rpm离心10分钟，倾出上清液，加入灭菌生理盐水10ml，麦氏比浊管比浊并将菌液稀释至约50~100CFU/ml。

1. 方法验证试验

菌落计数方法验证：试验组：①霉菌、酵母菌（常规法）；②细菌（常规法）；菌液组

供试品对照组：①霉菌、酵母菌（常规法）；②细菌（常规法）

控制菌方法验证：控制菌检查采用常规法。主要检测大肠埃希菌和绿脓杆菌。

供试品组；空白对照组； 阴性菌对照组；④ 阳性菌对照组

1. 计算方法：

三、文献综述

胶囊剂的应用已有十多年的历史，由于明胶囊壳具有生产工艺简单等优点，故迄今为止胶囊壳的囊材大多以明胶为主。但由于明胶囊壳存在的一些问题，如对湿氧敏感药物保护作用差、在贮藏过程中囊壳有崩解延迟及药物溶出度降低等现象^[1]，人们开始研发新型替代囊材。最近一种新型囊壳——羟丙甲纤维素空心胶囊大受欢迎，其具有良好的增溶性、黏结性、水溶性、稳定性和成膜性，较明胶空心胶囊仍具有明显的优势，如较低的含水量、较广的适用性、较快的溶出速度、较低的贮藏条件要求等^[3]。

本课题就是对一批羟丙甲纤维的空心胶囊进行检查。因为空心胶囊属于非无菌制品，所以采用微生物限度检查法。根据《中华人民共和国药典2010年版二部附录ⅪJ》微生物限度检查法，对羟丙甲纤维素空心胶囊作微生物限度检查以及进行方法学验证。根据国家药典会国药典发[2010] 98号文“关于执行《中国药典》2010年版微生物限度检查法和无菌检查法有关问题的说明”的规定：当进行药品无菌检查或微生物限度检查时，应进行方法验证，否则决不能出具“符合2010年版《中国药典》的规定”的结论^[6]。方法验证的目的是为了确认试验中供试品应选择《中国药典》收载的何种供试液制备方法及何种测定方法，含抑菌成分的药品进行无菌检查、微生物限度检查时，必须消除供试品的抑菌作用或使其抑菌作用可以忽略不计，才能根据《中国药典》规定的方法进行检查。

微生物限度检查方法的验证主要包括两大方面，第一方面是细菌，霉菌、酵母菌计数方法的验证，即准确率的验证；第二方面是控制菌检查法的验证，即专属性的验证。

首先是细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证。验证的目的是，确认所采用的方法适合该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，照此检查法和检验条件进行供试品细菌、霉菌、酵母菌数检查能保证检验结果的准确、可靠。验证的步骤分为四步，分别是根据样品特性，制定检验方法和检验条件；保证验证试验所用的仪器、培养基和试剂等均符合实验要求；按制定的方法进行试验；根据验证结果，判断是否符合验证的标准。若符合，按验证的方法和条件进行药品的微生物限度检查；若不符合，应重新设立验证方案，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。至于验证方法的选择，可有平皿法（包括稀释法）、薄膜过滤法、中和法、离心沉淀法、联合方法。最后，计数方法的验证即结果判断的标准为：在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应均不低于70%，若试验组的菌回收率均不低于70%，则按此供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数能保证检验结果的准确、可靠。若任一次试验中试验组的菌回收率低于70%，应采用培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新验证。

然后是控制菌检查法的验证。除试验菌株是按规定检查的控制菌选择的相应验证的菌株外，还要注意阴性对照菌株的选择原则，即口服选用金黄色葡萄球菌，外用选用大肠埃希菌。故在本次试验中拟检查大肠埃希菌和绿脓杆菌。验证方法的选择和细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证所用方法差不多，均有稀释法、薄膜过滤法、中和法、离心沉淀法和联合方法，不过控制菌检查法的验证还多了一个常规法。本次试验就拟采用常规法来检测控制菌，故主要说一下常规法的结果判断。阴性菌对照组未检出阴性对照菌，试验组检出试验菌，表明该法专属性强，可按此供试液制备法和控制菌检查法进行供试品的该控制菌检查；若试验组未检出试验菌，表明该供试品有抑菌作用，应采用稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新验证。

2010年，全球空心胶囊总销量已超过3100亿粒，其中92%是明胶空心胶囊，而另外8%则来自于非动物源性胶囊，其中羟丙甲纤维素(HPMC)空心胶囊的年增长率超过25%。对于国内胶囊生产企业来说，如果能成功开发运作非明胶胶囊，将获利丰厚。目前植物胶囊的利润是明胶胶囊的5～6倍，经济效益和社会效益十分可观。据专家预测: 目前我国胶囊类药品在药品中占很大比例，年需药用空心胶囊为2500亿粒以上，且还在以每年20%的速度递增，市场前景十分广阔^[3]。由此可见，对羟丙甲纤维素空心胶囊进行微生物限度检查以及方法学验证已经变得迫切且有意义。

四、参考文献

[1] 张存彦，王成港，王春龙,陈继英，王杰. 新型胶囊囊材—羟丙甲纤维素[J].中国药学杂志，2005，40（12）：891-892.

[2] 张先，张云，王海云，孙祥敏，尹长峰，冯苗，李源淼. 微生物限度检查方法建立[J].中国原子能科学研究院年报，2012，07：232.

[3] 羟丙甲纤维素植物空心胶囊[J].技术与市场，2014，21（12）：397.

[4] 占景华，石鹤坤，钟渊福，董智聪，胡永狮. 他克莫司胶囊微生物限度检查法验证的探讨[J].实用药物与临床，2014，17（11）：1442-1444.

[5] 李玉芹. 浅谈目前无菌检查和微生物限度检查存在的问题[J].中国药事，2007，21（12）：1011-1012.

[6] 关于执行《中华人民共和国药典》(2010年版) 微生物限度检查法和无菌检查法有关问题的说明[S].国药典发[2010]98号.

[7] 中华人民共和国药典委员会.中国药典[S]. 2010年版．北京: 化学工业出版社，2010：附录107-115．