一、拟研究或解决的问题：
抗体药物偶联物(ADC药物)具有抗体的靶向性和小分子药物的高毒性两方面的优点，对于免疫治疗疗效不明显的实体肿瘤具有显著的效果。目前上市的抗体药物偶联物如T-DM1，小分子药物与抗体多为随机偶联。产物存在均一性差，理化性质不稳定的缺点。将抗体特定氨基酸位点进行定点突变以产生活性半胱氨酸或赖氨酸等，再将小分子药物定点、定量地偶联到抗体上，由此所得的ADC不仅具有十分均一的DAR，而且表现出较好的体内药物动力学活性，有效提高了治疗窗口。
cG7 做为新一代的基因工程嵌合抗体，易于纯化，可特异性结合与结直肠癌、肝癌等癌细胞表面CD24抗原。嵌合抗体是由鼠源性抗体的V 区基因与人抗体的C 区基因拼接为嵌合基因，然后插入载体，转染骨髓瘤组织表达的抗体分子。因其减少了鼠源成分，从而降低了鼠源性抗体引起的不良反应，并有助于提高疗效。
目前已通过重组技术构建出cG7嵌合抗体，其轻链恒定区为kappa;链，存在稳定性差的问题。且之前通过CHO细胞表达cG7抗体，产量较低，耗时耗力。考虑到之后作为偶联小分子药物。我们将cG7抗体的轻链可变区进行替换，并对关键氨基酸进行突变，将新的cG7抗体基因连接到更为高效的HEK-293细胞表达载体中。通过饲养HEK-293细胞获得cG7-V205C抗体，并通过体外Elisa实验和流式结合检测该抗体对CD24抗原和阳性细胞的结合能力。
二、研究手段：
1、cG7-V205C抗体的构建。
将实验室已构建成功的含有嵌合抗体cG7轻链目的基因大肠杆菌(E. coli) DH5alpha;/pMH3-cG7-L进行平板挑取单克隆、复壮，利用质粒小量抽取试剂盒提取质粒。以提取的含cG7轻链的质粒为模板扩增出可变区部分，将其与扩增出的kappa;链基因相连接，并设计引物对特定氨基酸进行突变，获得新的cG7轻链。之后将新的轻链基因和原有的重链基因分别与pTT5表达载体进行酶连，转化到DH5alpha;大肠杆菌中，-70℃保存。
2、cG7-V205C抗体的表达与纯化
经过质粒抽提得到cG7-V205C抗体的轻重链质粒，将质粒在超净台中分别滤过除菌后，与瞬转试剂PEI混合，加到HEK-293细胞培养基中进行表达。收集足够的上清后，将上清离心、抽滤得到粗的抗体样品。之后，将该样品通过ProteinG柱进行纯化，收集洗脱液调整pH值就可以得到纯化好的cG7-V205C抗体溶液。
3、SDS-PAGE检测cG7-V205C抗体的稳定性。
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