MG53抑制心纤维化分子机制研究文献综述

 2022-12-17 06:12

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

一、课题背景

心脏纤维化是病变心脏重要的结构重构表现,心纤维细胞的活化,增殖,引起心脏电传导速度改变,电离散度增加,成纤维细胞分泌的细胞因子,不仅可以促成纤维细胞增殖,活化,还可以直接影响心肌细胞离子通道功能,是心肌病变进展的重要推动因素。心成纤维细胞活化机制尚未清除。MG53是横纹肌细胞特有的蛋白,文献资料显示,此蛋白对肺纤维化有作用,对心脏纤维化的影响尚未有文献报道。本项目采用TFG-beta;1诱发心纤维化,观察MG53对心成纤维细胞活化,增殖的影响,在整体和细胞水平探讨MG53对心脏纤维化的作用及机制。

  1. 要解决的问题

在整体和细胞水平探讨MG53对心脏纤维化的作用及机制,为MG53对心肌纤维化治疗作用研究做准备。

  1. 可行性分析

实验整体可行性良好,设备齐全,主要限制是MG53蛋白价格昂贵,分子水平研究受限。

  1. 研究方法和内容
  2. 研究方法:文献研究法、模型法、实验法、观察法等
  3. 内容

2.1动物实验(整体水平的研究)

成年SD大鼠,雄性,180-250g。设五组,分别是空白对照组、TGF-beta;1组、TGF-beta;1加黄芪甲苷组、异丙肾上腺组和异丙肾上腺素加黄芪甲苷组。空白对照组:8只;尾静脉注射生理盐水,注射剂量为0.15ml/100g,隔天一次共十天;从给药第五天开始,同时给予0.5%的CMC-Na灌胃,灌胃量为0.2ml/100g,每天一次共六天。TGF-beta;1组:8只;尾静脉注射TGF-beta;1,给药量为1.5mu;g/kg(注射剂量为0.15ml/100g),隔天一次共十天。TGF-beta;1加黄芪甲苷组:8只;尾静脉注射TGF-beta;1,给药量为1.5mu;g/kg(注射剂量为0.15ml/100g),隔天一次共十天;从给药第五天开始,同时给予黄芪甲苷,给药量为10mg/kg(灌胃量为0.2ml/100g),每天一次共六天。异丙肾上腺素组:10只;皮下注射异丙肾上腺素,给药量为5mg/kg(注射量为0.1ml/100g),每天一次共十天。(注:本次实验前5天给药量为2.5mg/kg,一天两次,间隔六小时)。异丙肾上腺素加黄芪甲苷组:10只;皮下注射异丙肾上腺素,给药量为5mg/kg(注射量为0.1ml/100g),每天一次共十天。(注:本次实验前5天给药量为2.5mg/kg,一天两次,间隔六小时);从给药第五天开始,同时给予黄芪甲苷,给药量为10mg/kg(灌胃量为0.2ml/100g),每天一次共六天。

分别在实验开始第一天、第五天和第十一天,共三次测心电图、取血(3500r 5min离心后取上清于-20℃冻存)。在第十一天处死,冲尽脏器内的血液后,取心脏、肝、肺、肾,称重每个脏器称重后取部分放福尔马林中保存,其余放-80℃冻存。

Masson染色:取保存在福尔马林中的组织,固定、切片、染色后观察纤维化情况;HYP检测:取冻存组织80-100mg,测羟脯氨酸含量;PCR:取冻存组织50-80mg,提取mRNA定量后逆转录、扩增,检测组织中MG53及纤维化因子(alpha;-SMA、FN、Collagen 1)表达情况。Western-blot:取冻存组织提蛋白后,测定组织中MG53的含量。

2.2 细胞水平研究

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