中国药科大学药学院毕业设计(论文)开题报告
课 题 名 称:人TNFSF15重组蛋白可溶性蛋白纯化方案的优化
外文题目:optimization of human TNFSF15 recombinant protein soluble expression and purification plan
中国药科大学药学院
2016年3 月
- 研究目的
肿瘤坏死因子超家族(Tumor Necrosis Factor Superfamily,简称TNFSF)是一组结构相关的细胞因子,在不同类型的细胞中具有广泛的生物学功能[1][2]。肿瘤坏死因子超家族-15(TNFSF15)作为 TNFSF的新成员,首先在人脐静脉内皮细胞中被发现,同时也被称为肿瘤坏死因子样配体1(TNF-like molecule 1,简称TL1)[3]。该因子因为具有明显的抑制内皮细胞增殖的作用,故也被称为血管内皮细胞生长抑制因子(Vascular endothelial growth inhibitor,简称VEGI)[4]。
TNFSF15(VEGI)作为南开大学药物化学生物学国家重点实验室的重点研究项目,其可溶性表达、纯化等制备工作及活性的检测工作占有着举足轻重的地位,而现行的实验室制备方法虽然已经很成熟,其过程中仍有一定可提升改善的空间。该蛋白的纯化方式采用的是固定金属离子亲和色谱(IMAC),是大多数融合型蛋白最常用的纯化方法[5-7]。组氨酸标签(his-tag)具有分子量小,融合简便,表达率高,不影响蛋白质结构功能,与配体特异性结合稳定等特点,故在质粒构建的过程中,在目的基因的N端引入了6times;his-tag,以得到高产量有活性的蛋白。但随着研究的深入,在探究如何使蛋白产量活性提高的同时,也在为科研向临床的转变做着准备。普遍认为his-tag不会对目标蛋白的结构功能造成影响,但有关文献报道在对某些蛋白的研究中,切除tag使蛋白活性有了相当程度的改变[8-9],除此之外,按照要求,在最终的药物中,蛋白需为无his-tag的形式,所以寻找到高效准确切除his-tag的方法不仅可能提高蛋白的生物活性,也是由科研向临床迈进的一大步。
目前移除多肽亲和标签主要有四种方法:化学法、内切蛋白酶法、外切蛋白酶法和基于内含肽的自我剪切法[10]。通过查阅文献和相关实验资料[11-13],肠激酶在切除融合标签方面具有良好的普适性和生物活性,如Lin等[14]在实验中就曾利用肠激酶切除N端的多聚组氨酸标签。随着柱纯化技术和分子生物学的发展,利用与目标蛋白具有相同标签的重组内切蛋白酶可以进行一步柱纯化[15],节省了时间的同时也降低了样品的损失大大提高了纯化效率。
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