化学修饰后的3α-羟类固醇脱氢酶对总胆汁酸试剂盒稳定性的影响文献综述

 2023-03-06 08:03

3alpha;-羟类固醇脱氢酶的化学修饰机制

摘 要:3alpha;-羟类固醇脱氢酶(3alpha;-hydroxysteroid dehydrogenase; 3alpha;-HSD; EC.1.1.1.50),是一种诊断用酶,可以用来测定血清中总胆汁酸(total bile acids, TBA)的浓度,而 TBA 含量是临床上检查肝功能是否异常的常用指标。但由于 3alpha;-HSD 的稳定性差、生产成本高等缺点,限制了其在临床医学中的应用。本实验室前期工作中, 以来源于睾酮丛毛单胞菌 Comamonas testosteroni ATCC11996 的 3alpha;-HSD 基因 hsd A为模板,构建可表达 3alpha;-HSD的基因工程菌(E. coli BL21/p ET28a-hsd),并对其酶学性质进行研究。本论文在此研究基础上,首先利用亲和纯化方法提纯3alpha;-HSD,然后用邻苯二甲酸酐中的羧基与 Lys 残基末端 ε-NH2 生成稳定的酰胺键,有效改善了酶的性能(邻苯二甲酸酐是 Lys 的专一性修饰剂)。最后,按照配方制成TBA试剂盒,在生化分析仪上检测新制成试剂与原试剂各项指标的比较、分析。

关键词:3alpha;-羟类固醇脱氢酶;化学修饰;邻苯二甲酸酐;生化分析仪;

1.3alpha;-羟类固醇脱氢酶性质及应用

3alpha;-羟类固醇脱氢酶(3alpha;-hydroxysteroid dehydro-genase,3alpha;-HSD,EC.1.1.1.50)是睾酮假单胞菌(co-mamonas pseudomonas testosteroni,CPT)产生一种类固醇脱氢酶。它可作用于多种类固醇基质,可逆地催化C19- 27类固醇3位羟基/酮基的氧化还原反应[1]。3alpha;-HSD自发现以来,被用于总胆汁酸检测试剂盒,目前是第五代总胆汁酸(TBA)检测试剂盒的核心成分[2]-[3]。第五代总胆汁酸检测试剂盒采用循环酶法,将微量胆汁酸放大,提高了试剂检测的灵敏度和准确度。在循环酶法TBA试剂盒中,产品质量将主要依赖3alpha;-HSD酶的质量。胆汁酸(Total bileacids,TBA)是胆汁的重要成分,在脂肪代谢中起着重要作用。胆汁酸主要存在于肝肠循环系统并通过

再循环起一定的保护作用。只有一少部分胆汁酸进入血行。促进胆汁酸肝肠循环的动力是肝细胞的转运系统并将其分泌入胆汁,促进缩胆囊素诱导的胆囊收缩、小肠的推进蠕动。各种肝脏病变可导致血清中胆汁酸含量增加成为临床检查肝脏功能的常用指标。血清胆汁酸含量下降时可反应胃肠机能有障碍[4]-[5]

2.3alpha;-羟类固醇脱氢酶的化学修饰简介

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