化学发光免疫分析技术的概述
发光在分析化学中是指当一个分子的电子从激发态跃迁到基态时所发出的光。这光包括荧光，磷光和化学发光。当基态分子吸收化学反应中释放的能量跃迁到激发态,处于激发态的分子以光辐射的形式返回基态时产生的光称为化学发光。化学发光的类型通常分为闪光型和辉光型两种。闪光型发光时间很短,只有零点几秒到几十秒。辉光型又称持续型,发光时间从几分钟到几十分钟或几小时,甚至更长。将抗原与抗体的高特异性的免疫反应与高灵敏的化学发光检测技术相结合而形成新的免疫分析技术,即为化学发光免疫分析(CLIA)。
1、化学发光免疫分析技术原理
化学发光免疫分析包括两个部分，一是免疫反应系统，二是化学发光系统。免疫分析法是利用抗原与抗体特异性结合而建立的高选择性生物化学方法。免疫分析根据标记与否可分为标记免疫分析法和非标记免疫分析法。抗原和抗体直接结合之后,理化性质有一定变化,如产生沉淀,利用这种性质的变化可以检测抗体或抗原,即实现非标记免疫分析。但是利用此方法难以进行痕量检测。所以针对抗体-抗原反应缺乏可供测量的信号等特点,人们将探针技术引入分析中以实现在线检测。标记免疫分析法中,最为成熟的方法是放射免疫分析法,但由于放射性物质的毒害,限制了它的应用。为了替代放射免疫分析法,灵敏度高的非放射免疫分析方法成为近年来的研究热点。按标记物有无放射性将免疫分析方法分为放射免疫分析法和非放射免疫分析法。非放射免疫分析法包括酶联免疫分析法、荧光免疫分析法、电化学免疫分析法、电化学发光免疫分析法和化学发光免疫分析法等。为可避免标记物的引入所带来了结合的抗原-抗体与过量的抗原或抗体的分离问题,标记免疫分析法又根据分离与否又分为均相免疫分析法和非均相免疫分析法。非均相免疫分析法是将标记的抗原和抗原样品加入到含有一定抗体的固相中,发生竞争性反应,洗去游离的抗原后对免疫复合物进行测定。而均相法无需分离。有些标记抗原和抗体结合后,其发光能力大大增强,所以只需测定竞争反应后整个溶液的发光强度增加程度就可以反应出结合上部分的量。这种方法虽然操作简单，但是有较大缺点，其灵敏度收到了限制，因没经过分离处理，导致样品中的杂质对发光的影响较大，非均相法就减少了样品中杂质的发光反应的影响，提高了灵敏度。而化学发光免疫分析法同时具有化学发光法的高灵敏度和免疫分析法的高选择性。化学发光免疫分析技术常采用双抗体夹心法、竞争法及间接法等反应模式。
图1.双抗体夹心法
图2.竞争法
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