CHOP瞬时过表达对CHO细胞VEGF抗体表达量影响的探究文献综述

 2023-01-10 03:01

开题报告内容:

一、研究目的:

哺乳动物细胞作为抗体药物生产所依赖的主要的表达系统,较之大肠杆菌等微生物表达系统而言,因具备翻译后修饰、产物胞外分泌等优势成为大多抗体药物生产的理想宿主。但是这些应用于表达的哺乳动物细胞仍旧存在着一些缺陷:在培养过程中,哺乳动物会发生细胞凋亡;进行细胞代谢产生有毒物质等,这些均会造成抗体药物表达量不高。为了弥补哺乳动物细胞的这些缺陷,积极进行理论探索,发现CHOP作为一种与内质网应激介导的细胞凋亡密切相关的核转录因子,可以激活一系列复杂的细胞内信号通路影响重组蛋白的表达量。本实验即是以中国仓鼠卵巢细胞( Chinese hamster ovary ,CHO)这一常用的哺乳动物细胞为宿主细胞,探究CHOP对宿主细胞中全人源化抗VEGF单克隆抗体表达量的影响,实现提高抗体药物在宿主细胞中表达量这一目标,并进一步提供理论依据和科学指导,以期能够利用CHOP基因实现对应用于抗体药物生产的细胞株的优化。

二、研究内容及研究手段:

1.研究内容:

(1)将已构建的含有仓鼠源CHOP基因表达载体的宿主菌DH5alpha;扩大培养并进行质粒提取;

(2)将提取的重组质粒瞬时转染稳定表达VEGF单克隆抗体的CHO-K1细胞;

(3)利用ELISA并使用Western-Blot对抗体表达进行验证,同时对比转染和未转染的细胞中CHOP表达量的变化;

(4)对比探究CHOP瞬时过表达对CHO 细胞VEGF抗体表达量的影响。

2.实验方法:

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