开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 拟研究或解决的问题
胰腺癌是一种恶性程度很高，诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤，约90%为起源于腺管上皮的导管腺癌。其发病率和死亡率近年来明显上升。5年生存率lt;1%，是预后最差的恶性肿瘤之一。QM属于一种抑癌蛋白而TFEB可能促进胰腺癌，本次课题旨在探讨TFEB与QM在胰腺癌中的相关性。
- 采用的研究手段
第一阶段运用RNAi敲低QM,然后采用WB和QPCR检测TFEB的表达量；第二阶段运用RNAi敲低细胞中的TFEB，再用WB和QPCR检测QM的表达量。
RNA干扰（RNA interference, RNAi）：是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。
蛋白印迹法：蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。主要分为以下几个步骤：①蛋白质样品获得：细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃，13,000g离心15min。取上清液作为样品。②电泳：制备电泳凝胶，进行SDS-PAGE。③转移（半干式转移）④洗膜：将TBST置入弯盘内，清洗PVDF膜，洗三次，每次10min.⑤封闭：5%脱脂牛奶（0.2g脱脂奶粉 4mlTBST，用漏斗配制），将膜放入手套内，打入封闭液，封闭液的量=长x宽x0.2，室温摇床一小时。TBST洗膜三次，每次十分钟。⑥一抗封闭，过夜，再洗涤。⑦洗膜，三次，每次十分钟。⑧加入二抗，室温。⑨洗膜。⑩曝光。
QPCR(实时荧光定量核酸扩增检测系统): QPCR至少有以下特点：所用仪器少，只用一台仪器。检测时间短，只须45分钟～1小时10分钟而定性PCR须3～4小时，酶免终点定量须6～8小时，荧光终点定量须2～3小时。主要操作步骤：①提RNA（Trizol试剂盒
提取）。②逆转录。③QPCR.
三、文献综述
自噬是使用溶酶体机制的细胞成分的高度保守的自我降解过程。中枢自噬调节因子TFEB在PDAC中表达并具有活性，但在TFEB敲低后自噬持续存在，提示替代旁路信号传导。转录因子EBEB是MiTF / TFE蛋白家族的成员，其含有用于DNA结合的碱性螺旋 - 环 - 螺旋结构域和用于异二聚化的亮氨酸 - 拉链结构域（1）。 TFEB通过在协调的溶酶体表达和调节（CLEAR）网络中正调节基因来控制溶酶体生物发生和自噬.TFEB的激活导致CLEAR基因的协调上调，其共同提高囊泡运输的效率并促进溶酶体中的最终底物降解。有研究指出自噬途径促进胰腺导管腺癌（PDAC）的生长，抑制mTORC1或营养饥饿消除TFEB磷酸化lation并触发其核移位和自噬/溶酶体基因级联的转录。研究发现TFEB致罕见恶性肿瘤发展的原因：通过特定基因易位（Alpha-TFEB融合）异常表达TFEB会导致小儿肾细胞癌的不同亚型（2）。研究指出靶向TFEB可能不是PDAC的有效抗癌策略，将会通过集中研究如何通过关键癌基因调节TFEB和相关的MiT/TFE蛋白（3）。QM 基因具有保守性L16p /L10e 蛋白质家族( Pfam 蛋白质家族数据库) 包括三大类蛋白质: 真核生物核糖体蛋白L10( RPL10，也称为QM) 、真细菌核糖体蛋白L16 及古细菌核糖体蛋白L10e。L16p /L10e 蛋白质家族蛋白主要在核糖体大亚基上构建氨酰tRNA 结合位点，并且在进化上非常保守，特别是真核生物核糖体蛋白L10［5］。如: 茶QM 同源基因CsQM 包含651 bp的开放阅读框，编码216 个氨基酸残基，与其它植物中得到的QM 同源物在核苷酸和氨基酸水平上具有71%—87%和85%—91%的相似性（4）。另外，序列分析显示真核生物核糖体蛋白L10的N 端175 个氨基酸高度保守，特别是带电氨基酸; 相比而言，它们在C 末端的变异相对较大，但是在同一进化水平的物种内还是相当保守的。进化分析也表明，QM 基因进化速度较慢，大约每2 200 万年有1%的改变（5）。QM蛋白具有多种多样的生物学功能,其中就包括QM 的肿瘤抑制功能,由TFEB于QM对胰腺癌分别可能的促进和抑制作用，猜测胰腺瘤细胞中TFEB的表达可能与QM的表达的量呈负相关，来帮助找出早期胰腺癌诊断的方法，并寻找可能的抗癌靶点。
四、参考文献
以上是毕业论文文献综述，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
