MIR7972基因的克隆与表达载体构建文献综述

 2022-12-25 12:04:12

开题报告

一、拟研究的问题

miR7972是一条miRNA基因。它存在于唇形亚纲的唇形目、茄目和紫草目的一些物种中。由MIR7972产生的miR7972成熟体能靶向切割DNA去甲基化酶基因DML的转录本。在药用植物丹参中，Smi-miR7972特异地靶向剪切SmDML1的转录本。初步的实验表明，Smi-miR7972很可能介导SmDML1基因参与调控丹参酮生物合成。本课题完成miR7972基因克隆并构建表达载体，为下一步利用农杆菌介导的丹参遗传转化法转入丹参、获得转基因植物做准备，为研究Smi-miR7972的功能奠定基础。

二、研究手段

本课题将利用5rsquo;-和3rsquo;-RACE技术结合PCR扩增技术，克隆得到Smi-miR7972的全长cDNA序列。然后，构建具有潮霉素筛选标记的Smi-miR7972过表达载体。此外，还将利用CRISPR/Cas9技术，在Smi-miR7972基因上产生Smi-miR7972和Smi-miR7972*的位点附近选择2个打靶位点，构建具有潮霉素筛选标记和两个sgRNA表达框的Smi-miR7972基因敲除载体。最后，将构建的载体用冻融法转入农杆菌。要求掌握文献查阅的方法，通过上述实验操作，熟悉RNA提取、反转录、5rsquo;-和3rsquo;-RACE扩增、构建表达载体等实验操作，能够构建符合要求的表达载体。

三、文献综述

摘要 丹参产生的miR7972是一种MicroRNA，初步研究表明miR7972可能对丹参DNA甲基化有调控作用，DNA甲基化程度的改变可以影响丹参中DML基因的表达，进一步影响丹参中丹参酮的合成。该文综述了植物miRNA研究进展、DNA甲基化的基本概念和生物学功能、丹参概述及丹参酮生物合成途径和调控机制。

关键词 miRNA，miR7972，DNA甲基化，丹参，丹参酮

1 植物miRNA研究进展

1.1 植物miRNA作用及机制

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