开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、选题背景
心肌缺血缺氧是指心脏的的血液灌注减少,导致心脏的供氧减少,心肌能量代谢不正常,不能支持心脏正常工作的一种病理状态。同时心肌在经过一段时间的缺血后再恢复血流心肌组织的受伤程度迅速增加。
钠钙交换体(NCX)是一种双向离子转运体,有前向型和反向型两种工作模式。前向型将钠离子转入细胞内,钙离子转出细胞,对钙离子及时排出有重要作用;反向型将钙离子转入细胞内,钠离子转出细胞,通常会造成细胞内钙离子超载。NCX的转运比为Na :Ca2 =3:1,是一种生电性转运,电流方向与钠离子方向一致。持续性钠电流是电压除极钳制后几百毫秒的时间内钠通道活动产生的电流,在维持心室肌细胞动作电位平台期中起重要作用。不同程度大小的持续性钠电流可产生不同程度的动作电位平台期延长。低氧早期增大的持续性钠离子电流是造成低氧早期细胞内Ca2 超载的主要原因,从而可能造成心肌细胞电生理紊乱和心肌坏死。
黄芪和人参均为传统的补气中药。中医认为黄芪有补气固表,托毒排脓,利尿,生肌的功效;人参有补气,固脱,生津,安神,益智的功效。现代医学发现人参皂苷和黄芪甲苷对缺氧造成的心脏组织损伤有良好的保护作用。黄芪甲苷可以减轻缺氧时细胞内的钙超载的情况,降低心肌电生理紊乱和心肌坏死的可能;人参皂苷Rg1能增强缺氧损伤后细胞的活力,组织缺氧引起的线粒体膜电位降低,减少Cyc-C释放,减轻心肌细胞缺氧的损伤。
二、实验目的
本实验利用膜片钳技术,通过观察缺氧后细胞NCX和钠通道蛋白表达的改变,探讨缺氧心肌细胞电生理特性的变化及黄芪甲苷和人参皂苷Rg1等药物对缺氧心肌细胞电生理特性的变化的保护作用。
三、实验内容
本实验将心肌细胞系H9C2缺氧24小时制备缺氧模型,并在模型基础上给予黄芪甲苷和人参皂苷Rg1干预,通过Western Blot和PCR等实验手段检测细胞NCX蛋白和钠离子相关通道蛋白和RNA的表达。同时利用膜片钳技术检测心肌细胞缺氧模型及给予药物干预情况下,心肌细胞电生理特性的改变。
四、进度安排
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