一种双特异性抗体的表达纯化及体外初步活性鉴定文献综述

 2022-12-06 16:53:36

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

一种双特异性抗体的表达纯化及体外初步活性鉴定

研究背景

双特异性抗体是含有二种特异性抗原结合位点的人工抗体，能在靶细胞和功能分子之间架起桥梁，激发具有导向性的免疫反应，2014年12月3日，FDA批准了安进公司的靶向CD19和CD3的双特异性抗体Blinatumomab上市，但是这款药物体内半衰期比较短，病人需要进行长达一个月左右的静脉输注。Blinatumomab是首个获批的双特异性抗体，同时针对肿瘤细胞表面的CD19抗原和T细胞表面的CD3抗原。Blinatumomab最初由抗癌药物研发公司Micromet研发，2011年Micromet公司发布了Blinatumomab的一项小规模II期临床试验结果，结果显示化疗后存在微小残留灶的急性淋巴性白血病患者，使用Blinatumomab后完全缓解率达到80%[1]。2012年1月安进公司收购了Micromet公司，从而获得了Blinatumomab的开发权。2012年安进公司公布了Blinatumomab的一项大规模II期临床试验结果，复发或难治型急性淋巴性白血病患者使用Blinatumomab后完全缓解率达到43%。2014年10月，安进宣布，FDA已经接受了他们blinatumomab抗体生物制品许可申请（Biologics license Application,BLA），用于治疗费城染色体阴性（Ph-）复发性/难治性前体B细胞急性淋巴细胞白血病。CAR-T即嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，这是一个出现了很多年，但是近几年才被改良使用到临床上的新型细胞疗法。在急性白血病和非霍奇金淋巴瘤的治疗上有着显著的疗效，被认为是最有前景的肿瘤治疗方式之一。正如所有的技术一样，CAR-T技术也经历一个漫长的演化过程，正是在这一系列的演化过程中，CAR-T技术逐渐走向成熟。。来自马琳和斯图尔特格林鲍姆癌症中心的Koji Tamada教授及其团队研究出了一种能够针对多种肿瘤有治疗效果的CAR-T技术[2]。他们设计出了一种能够结合特异标记物的CAR，并将其表达于T细胞表面，称为anti-特异标记物-CAR-T[3]。体内实验表明，给荷瘤小鼠注射一定剂量的anti-特异标记物-CAR-T及相应的特异标记物-IgG（各类治疗抗体）能够明显缩小肿瘤的体积。由于目前特异标记物修饰的IgG技术已经非常成熟，因而此技术适合于多种药物联合治疗并适合于不同肿瘤的治疗。

目前研究现状

双特异性抗体是一种具有两个抗原决定簇结合位点，能够选择性的募集体内效应细胞或效应分子到达靶细胞周围，提高局部NK细胞或T细胞的浓度，增强特异性杀伤作用[4]。目前这种抗体的制备方法主要有：化学偶联法、杂交-杂交瘤法、基因工程制备法[5]。早在30年前，Medarex公司就开发出了世界上第一个双特异性抗体，并且于2001年进入Ⅲ期临床。由于当时生产条件的限制，导致了这种治疗方法的逐渐沉寂。2009年，欧盟委员会批准了Fresenius生物技术公司的Removab（catumaxomab）的上市申请，这是全球首次获批的双特异性抗体[6]。近十多年来，随着双特异性抗体技术的进一步成熟，很多家公司加入了双特异性抗体的研发领域。目前在双抗领域处于领先地位的主要有安进、基因泰克、强生、赛诺菲等。2014年12月，FDA批准了安进公司的靶向CD19和CD3的双特异性抗体Blinatumomab上市，自此后，国内外掀起了一股研究热潮[7]。经过文献调研，目前主要研究的肿瘤双特性抗体主要有EPCAM、CD3、CD20、Her2、CD19、CEA、PSMA、Angiopoietin2、VEGF、Her1、Her2、Her3、CD123、GPA33、hapten、CD30、CD16、cMET等。目前具有功能的双特异性抗体药物主要用于自身免疫系统疾病的治疗、肿瘤的免疫治疗以及感染性疾病的治疗，除此之外，在组织再生和临床诊断方面也有应用[8]。目前国内也有一些企业正在进行双特异性抗体的研究，如博生吉医药科技（苏州）有限公司开发的针对多发性骨髓瘤的CD3/CD138 BiTE，友芝生物制药研发的（YBODY）双特异性抗体，以及信达生物正在研发的针对多种实体瘤及相关代谢性疾病的（IBI302）双特异性抗体。

研究目的

  • 设计出一种能够治疗不同肿瘤的双特异性抗体，具有多能性，同时将这项技术开发成一个药物筛选平台。
  • 本课题选择了CD3及特异标记物两个靶点设计了一个双特异性抗体（暂称为FC3），通过特异标记物修饰的治疗性抗体及FC3组装出一个双特异性T细胞衔接器，延长半衰期，易于蛋白的分离纯化。
  • 将FC片段引入双特异性抗体，增强药物的体内半衰期，同时在体内介导ADCC和CDC效应，从而增强药物的抗肿瘤效果[9]。

主要成果形式

  1. 开发为一种用于灵活的用于多种肿瘤治疗的药物。
  2. 建立一个新的药物筛选平台，用于多靶点不同机制抗肿瘤药物的筛选。
  3. 整理研究成果并发表文章。

本课题进度

本课题主要分为以下几大部分：（1）双特异性抗体的FC3的设计、表达载体的构建（2）表达质粒序列的验证及细胞的瞬时转染表达验证（3）FC3的真核表达（4）FC3的大量表达及纯化（5）体外药效学验证（6）体内药效学验证。目前实验已经进展至FC3的表达纯化部分，后期将进行体内和体外药效学验证。

剩余内容已隐藏，您需要先支付 10元 才能查看该篇文章全部内容！立即支付

发小红书推广免费获取该资料资格。点击链接进入获取推广文案即可： Ai一键组稿 | 降AI率 | 降重复率 | 论文一键排版

您可能感兴趣的文章