玉液汤抑制AD秀丽隐杆线虫表达Aβ蛋白作用研究文献综述

 2023-02-24 20:35:03

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

一．研究背景

阿尔茨海默病( Alzheimers disease，AD) ，又称老年性痴呆，是一种进行性神经系统退行性疾病，在老年人中发病率越来越高，临床上主要表现为渐进性记忆减退、认知功能障碍、日常生活能力逐渐下降以及其他神经精神症状和行为障碍。阿尔茨海默病的病因尚未明确，目前主要有三种假说:beta;淀粉样蛋白级联假说[1]、Tau蛋白假说和血管源性假说[2]。其中beta;淀粉样蛋白级联假说占主导地位，该理论认为AD 的特征性病理变化之一是老年斑的形成，而老年斑的核心成分是Abeta;，包括Abeta;40和Abeta;42( Abeta;42 更易发生淀粉样变性)。Abeta; 是机体的正常代谢产物，由beta;-淀粉样前体蛋白( beta;-amyloid precursor protein，APP) 经beta;-分泌酶和gamma;-分泌酶水解而来，在正常情况下它的产生和降解处于动态平衡，当某些原因导致APP 代谢异常时，Abeta; 生成增多和( 或) 降解减少就会造成Abeta; 大量沉积[3]。Abeta;沉积可导致AD发病。降低Abeta;在大脑内的积量可延缓或减轻阿尔茨海默病的症状。AD 的发病机制异常复杂，没有任何一种学说能够完全解释AD 的发病机制，其涉及多条分子信号通路，各机制之间相互联系，由于AD 的发病机制尚未明确，AD 的治疗和预防都面临巨大的挑战。目前临床治疗AD 的主要药物是乙酰胆碱酯酶抑制剂和N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体非竞争性拮抗剂，这两类药物可以通过增强胆碱能神经传导活性，改善中枢神经递质代谢障碍和NMDA 受体激活后诱发的兴奋性毒性，缓解轻度、中度AD 患者行为症状，但不能停止或逆转AD 病程发展。针对Abeta; 的疫苗和单抗类新药虽然进入临床试验阶段，但由于来源困难、价格昂贵或是出现不良反应均未获得成功[4]。由此可见。迄今已有的皆针对某一靶点，单一成分药物的治疗策略很难取得满意效果，而中药复方具有多成分、多途径、多靶点的优势，所以开拓治疗AD 的新途径，寻找治疗AD 的中草药势在必行[5]。

玉液汤来源于《医学衷中参西录》，组成为生山药（30g） 生黄芪（15g） 知母（18g） 生鸡内金（6g） 葛根（5g） 五味子（9g）天花粉（9g），具有益气滋阴、固肾止渴的功效，在临床上多用于治疗消渴症即糖尿病，而近年来较多的研究结果显示AD与II型糖尿病有关，有学者甚至提出将阿尔茨海默症称作III型糖尿病。多年研究表明，DM可通过多种途径影响脑部血液供应和（或）脑功能。加州研究人员对22 852名II型 DM 患者进行长达8年的追踪调查发现，对DM患者来说，血糖越高，发生痴呆的风险越大，血糖高意味着D M严重。Watson 等研究发现，给健康老年人输入胰岛素，可使脑脊液中胰岛素含量增高，同时增加脑脊液中 Abeta;42 的含量[6]。故此推测玉液汤具有改善AD病症状的作用。

秀丽隐杆线虫( Caenorhabditis elegans，C． elegans) 是研究与衰老相关疾病的良好模型，因其具有导致AD 发病的同源基因等特点被应用于AD 机制的研究。Sydney Brenner 于1963 年首次提出将线虫作为研究发育生物学和神经生物学理想的模式生物[7]。其作为模式生物虫体全身呈透明状，便于荧光显微镜对任一细胞进行观察而且具有与人类保守性高的神经系统。线虫雌雄同体成虫有959 个体细胞，雄虫成虫有1 031 个体细胞[8]，由302 个和391 个神经元组成雌雄同体成虫和雄虫的神经系统。其神经元细胞占其体细胞的37%以上。神经元的结构简单，只有一个或两个不分叉的突起，形成或接受突触连结，但其基本功能与其他哺乳动物相似，并包含多种经典的和其他哺乳动物类似的神经递质如: 乙酰胆碱、五羟色胺、多巴胺、谷氨酞胺，氨基丁酸和神经肽等。这些神经递质在神经元中的合成、储存和代谢等过程都与哺乳动物具有高度相似性。1995 年，Link[9]首次在肌肉细胞中建立了由特异性启动子unc-54 控制Abeta; 表达的转基因线虫模型该模型称为CL2006，CL2006能够在细胞内产生人源性的Abeta;1-42 沉积以及出现机体进行性的麻痹表型，主要用于Abeta; 毒性和淀粉质形成机制的研究[10]。研究者在线虫中发现早老素（presenilin）sel -12 基因，其编码的蛋白具有多跨膜结构域，并且与阿尔茨海默（AD）相关蛋白S812 相似[11]。已构建的转基因线虫模型CL2006，将人源beta;- 淀粉样蛋白在线虫中异源表达，诱导淀粉样蛋白沉淀物形成，引起线虫麻痹，从而导致线虫排卵困难[12]。虽然CL2006模型Abeta; 的表达被限制在肌肉细胞中，但仍然部分解释了Abeta; 表达和Abeta; 的毒性的关系[13].

二．实验目的和意义

本实验采用秀丽隐杆线虫作为模式生物，建立AD模型，经玉液汤水煎液处理后染色，对其改善Abeta;蛋白沉积作用进行初步研究。

三．实验方法

线虫同步化→药物处理→固定→通透→染色→荧光下观察并拍照→数据处理

将同步化后的卵接至大板上培养，为保证每个板上线虫数目在3000条左右，每板应接卵4000-5000个。在20℃培养四天。

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