一、拟研究或解决的问题本实验将探讨黄芩苷能否通过调节肠道菌代谢物来保护肠粘膜屏障、血脑屏障从而减少脑内炎症,改善抑郁样行为。
二、采用研究手段1.抑郁症动物模型:慢性不可预知温和刺激模型(CUMS)通过给予小鼠随机几种不同的应激方式,如束缚应激、剥夺食水、冰水游泳、昼夜颠倒等,使动物不能预料刺激的发生, 持续8周造成小鼠抑郁模型 [1]。
2.行为学检测:行为学实验广泛用于神经精神类疾病动物模型的评价,在啮齿类动物情绪测试中,可用于评估模型动物的抑郁、焦虑行为。
如糖水偏好实验、旷场实验、强迫游泳实验和悬尾实验等[2]。
3.蛋白印迹技术:即Western Blot,其原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色,然后分析着色的位置和着色深度来获得特定的蛋白质在细胞或组织中的表达情况。
Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),以抗体为探针,以标记的二抗为显色来检测蛋白质。
经PAGE分离的蛋白质样品转移到固相载体上,多采用PVDF。
固相载体以非共价键的形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。
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