课题来源：自拟课题课题依据：基因编辑是一种修饰特定基因的新技术，主要依赖于细胞体内的同源重组反应，但自发状态下的同源重组反应发生的概率很低，这会严重影响基因编辑的效率，而如果在靶标DNA上引入双链切口（DSB）则可以显著提高同源重组反应发生的概率。
到目前为止，DSB的引入都依赖于基因编辑工具酶对靶标DNA的切割，所用的工具酶主要包括归巢核酸内切酶（Meganucleases）[1]、锌指核酸酶（ZFN）[2]、转录激活样效应因子核酸酶（TALEN）[3]和成簇规律间隔短回文重复（CRISPR/Cas9）[4]等，但这四种酶都有自己的不足。
针对四种工具酶的不足之处，前期研究结果设计出一种不受靶标DNA序列限制的工具酶，这种酶不通过核酸序列识别靶标，而是通过核酸结构识别靶标，即核酸结构介导识别切割酶（SGN）。
研究结果显示这第一代SGN已经被证明可以对不同序列靶标DNA进行切割，但其与CRISPR/Cas9 的切割效率还存在较大的差距。
因此，有必要对影响SGN切割效率的原因进行分析，以期进行进一步的改造和优化。
根据SGN的切割原理，导致SGN切割效率较低的可能原因是，探针侵入双链DNA与靶标序列结合的效率较低以及SGN需要形成二聚体才能进行切割。
因此，针对现有基因编辑工具酶设计复杂、成本较高、不能对任意靶标DNA进行切割等缺点，本研究在已自主构建的第一代核酸结构介导识别内切酶 SGN 的基础上，拟通过使 SGN 由单体变为二聚体形式的方式，对SGN进行改造，提高SGN的切割效率，构建出第二代核酸结构介导识别内切酶SGN，争取实现对任意靶标 DNA 的识别切割，促进基因编辑技术的发展。
主要解决的问题：1、重组表达质粒的构建在表达质粒pET28a( )中插入表达重组酶的编码序列，构建表达质粒。
加入大肠杆菌ArcticExpress感受态细胞，利用热激法将质粒转化入ArcticExpress，向转化产物加入800mu;L LB培养基（1% NaCl，1%蛋白胨，0.5%酵母粉），37℃ 100 r/min培养1h。
提取质粒，用限制性内切酶处理提取的质粒，琼脂糖凝胶电泳验证质粒的正确性，以挑选阳性克隆菌。
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