细胞毒类药物导致的免疫反应文献综述

 2022-12-26 15:22:59

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

1、拟研究解决问题：

本课题将要研究喜树碱类药物导致肿瘤细胞释放双链DNA的机制，并探索释放的双链DNA与免疫系统间的关系。

2、采用的研究手段

（1）探究喜树碱诱导肿瘤细胞释放dsDNA是否存在细胞异质性。采用不同种类的肿瘤细胞系，通过给予SN38，将细胞离心后收集上清，通过PicoGreen试剂盒分析其上清中dsDNA含量。

（2）分析胞质dsDNA的来源。根据前期文献调研，dsDNA主要来源与核DNA和线粒体DNA，在给予CPT类药物SN38后，将细胞离心后收集上清，采用qPCR法，分析核DNA标记物GAPDH和线粒体DNA标记物ATPase8的含量。

（3）探究微核产生与dsDNA释放的关系。采用免疫荧光方法，通过检测胞浆dsDNA与核膜的标志物Lamin B的共定位考察释放到胞浆中的dsDNA与微核的关系；通过检测DNA损伤标志物gamma;H2AX与释放DNA的共定位考察dsDNA释放与DNA损伤的关系。取离心后细胞上清，PicoGreen试剂盒检测其上清中dsDNA含量。

（4）探究基因组稳定性与胞质dsDNA和dsDNA释放量之间的相关性。选用突变率不同的细胞系，分别采用Nocodazole诱导微核分泌，并对Lamin B和DAPI进行免疫荧光标记后，分析胞质中dsDNA含量。取离心后细胞上清，PicoGreen试剂盒检测其上清中dsDNA含量。

（5）探究喜树碱诱导肿瘤细胞释放dsDNA能否激活免疫细胞。采用SN38孵育肿瘤细胞，取肿瘤条件培养基孵育骨髓源树突状细胞，并取上清，用ELISA检测其中IFN-beta;含量，考察树突状细胞的激活效应。

3、文献综述

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