一、课题背景
通过液相质谱分析方法，测量亮丙瑞林在人血浆中的浓度，以期建立一个快速、科学及合理的方法来进行人血浆样品的检测。为亮本瑞林在人体内的药代动力学研究奠定基础。亮丙瑞林为促性腺激素(GnRH)的九肽合成类似物，能促使垂体前叶释放黄体生成激素(LHRH)和卵泡刺激素(FSH)，调节性腺激素分泌，提高睾丸酮和二氢睾丸酮的血清浓度，从而达到治疗生殖系统疾病的功能。用于治疗前列腺癌、子宫肌瘤、卵巢囊肿、乳癌及小儿隐睾症等。
- 要解决的问题
1、检测实验方法探索中内标物、基质、抗凝剂等的正确性。
2、通过测定所配制各浓度标准品及质检溶液的液质参数，准确做出亮丙瑞林在人血浆中浓度变化的标准曲线。
3、确证实验过程中系统的稳定性，以及标准品在各条件下稳定性（如光稳定性）
- 可行性分析
待测物标准品：亮丙瑞林
内标标准品：曲普瑞林
曲普瑞林为亮丙瑞林结构类似物，在质谱条件下子离子相同，为检测提供可靠性，因此作为内标使用。本验证方法采用液相/液相质谱串联的检测方法，在业内为比较可靠地检测方法，通过检测物在色谱柱中保留和分离度不同进行分析，后经过质谱三重四级杆将碎片离子化便于精密检测。验证方法采用800倍线性，通过验证定量在标曲回归后的线性，可以检测未知样品在血浆中的浓度。
- 研究方法和内容
- 系统适应性
- 每个分析批运行开始前应进行系统适应性测试，连续进样6次。
- 对于含基质分析批，系统适应性测试样品浓度和配置方法同标准曲线定量下限样品。
- 对于仅有净溶液样品（不含基质的）的分析批，如工作溶液稳定性等，系统适应性样品中待测物和内标的浓度不高于该批次最低浓度样品。
- 系统适应性接受标准：6次重复进样待测物和内标的保留时间精密度（%CV）应 le; 5 %；待测物与内标峰面积的比值精密度（%CV）应 le; 10 %。
- 标准曲线
- 每天新鲜配制含8个浓度水平的亮丙瑞林的标准曲线样品，每个浓度2个重复，包括：
- 定量下限，LLOQ（0.100 ng/mL）；
- 定量上限，ULOQ（80.0 ng/mL）；
- 配制以下浓度的标准曲线样品：0.100，0.200，1.00，2.00，5.00，20.0，65.0和80.0 ng/mL。
- 其中一套标准曲线在分析批开始时进样，另一套在结束时进样, 每一套标准曲线样品前进样一个双空白样品和一个零样品。
- 不符合接受标准的标准曲线样品不参与标准曲线回归，标曲样品的剔除应从偏差最大的开始，然后再次进行回归，再剔除不符合接受标准的偏差最大的标准曲线样品，如此依次剔除不符合接受标准的标准样品，直至所有参与标曲回归的样品皆满足接受标准；线性回归的决定系数（R2）应不低于0.9801。
- 标准样品准确度偏差不超过plusmn;15%，定量下限标准样品准确度偏差不超过plusmn;20%；至少75% 的标准曲线样品符合接受标准，且至少一个定量下限和定量上限符合接收标准；至少有6个浓度水平的标准曲线样品参与回归（至少一个样品符合接受标准）。
- 通过使用权重因子1/x2，线性回归得到理论浓度与响应之间的线性关系进行定量，权重因子在整个方法验证中须保持一致。
- 质控样品
- 使用新鲜配制的标准曲线样品定量新鲜配制或分装的质控样品。
- 在以下情况下，质控样品可以被剔除，不参与计算：由于色谱或系统故障，或在配制或前处理过程中出现问题并有相应记录。任何被去除在计算之外的数据都要在最终报告和原始数据中做出解释。
- 以下浓度水平的质控样品应用于批内/批间准确度和精密度的考察：
- 0.100 ng/mL（定量下限，LLOQ），0.300 ng/mL（低浓度质控样品，LQC），3.00 ng/mL（中浓度质控样品，MQC），60.0 ng/mL（高浓度质控样品，HQC）。
- 只在稀释可靠性验证时需要配制稀释质控样品DQC（稀释质控样品，10*DQC浓度为600 ng/mL）。
- 精密度由变异系数（%CV）来评价。精密度和准确度偏差计算如下：
- 精密度（%CV） =（标准偏差 / 平均值） 100
- 准确度偏差（%Bias） =（测得浓度 -理论值）/ 理论值 100
- 工作计划
2月28日—3月17日：完成文献查阅、开题报告等前期工作。
3月18日—5月10日：完成实验工作。
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