胶体金免疫层析法检测D-二聚体的研究
摘要： D-二聚体是一种纤维蛋白的降解产物，可以通过检测血液中的浓度来帮助诊断。自20世纪90年代以来，它已经成为一个重要的检测指标。胶体金免疫层析法是一种常用的标记方法，它是以胶体金作为标志物或显色剂，应用于双抗夹心反应的一种免疫标记技术。它有其独有的优点，可以快速检测人体内的D-二聚体含量，在研究中已被广泛使用。胶体金免疫层析法具有快速测定、重复性好，灵敏度高的特点，而且不存在内源酶的干扰跟放射性同位素污染的问题，已经成为继同位素、酶、乳胶和荧光素标记技术之后的一种新型标记技术。
关键词： D-二聚体；胶体金；免疫层析法；快速检测
免疫层析法是近些年来兴起的一种快速诊断技术。它有很多的优点，比如样本不需要特殊处理，试剂和样本用量很小，敏感性跟特异性高，既可用于抗原检测，也可用于抗体检测。还有它的检测时间比较短，提高了检测速度，实验的结果又可以长时间保存。免疫层析法的操作简单，不需要显微镜等贵重仪器，很适于现场应用。现在在临床上已经把D-二聚体视为唯一反映凝血和纤溶的理想指标，对高凝状态和血栓性疾病的诊断跟预防有指导意义，对降低患者的发病率很重要。近10年来，已经建立了多种很有价值的D-二聚体的检测方法。早在80年代末90年代初期，人们就发现D-二聚体对临床上疑诊为静脉血栓形成的患者高度敏感，但不特异。在这些患者中，当血浆中的D-二聚体浓度低于某一临界值时，阴性预测值大于90%，这样就可以作为排除静脉血栓形成的筛选试验。近年来，D-二聚体的临床应用越来越广泛。大量的研究已经充分证实了D-二聚体检测在诊断下肢深静脉血栓和肺栓塞中的应用价值。可见血浆中的D-二聚体浓度变化对于身体的一些疾病有一定的预示。
1、胶体金的实质
胶体金是由氯金酸（HAuCl4）在抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸、白磷等还原剂的作用下生成，可聚合成带负电的有一定大小的金颗粒形成的疏水溶液。由于静电作用，金颗粒之间会相互排斥而形成稳定的胶体状态，故称为胶体金。它具有高电子密度、介电特性和催化作用。在弱碱环境下带负电荷的胶体金可与蛋白质分子的正电荷基团牢固结合。这种静电结合并不会影响蛋白质的生物特性。因此胶体金可以广泛地应用于免疫学、组织学、细胞生物学和病理学等领域。
胶体金的标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的过程。吸附的机理是胶体金颗粒表面带负电荷，与蛋白质的正电荷发生静电作用牢固结合。用还原的方法可以很方便地制备出不同颜色不同粒径的胶体金溶液。
- 免疫层析法的原理
免疫层析法是将特异性抗体固定在硝酸纤维素聚酯膜上，然后在硝酸纤维素聚酯膜的一端滴加样品，由于毛细作用，样品会沿着膜向另一端移动，当移动到有抗体的位置时，样品中相应的抗原会跟固定的抗体发生特异性结合，而胶体金可以使这一区域呈现一定的颜色，以达到检测的目的。
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