课题背景：
乳腺癌是全球第二大癌症死亡原因，每年超过40万人死亡。异质性是治疗乳腺癌的主要困境，传统的化疗和放疗治疗手段单独使用已不能解决乳腺癌的耐药与转移性等问题。目前，对肿瘤微环境深入研究以及部分免疫检查点的药物的临床实验，为治疗乳腺癌的增殖、转移以及耐药提供了新的途径。诸多研究中发现，CD73在乳腺癌、肠癌、卵巢癌和胶质瘤等多种肿瘤中高表达。
CD73，又称胞外5-核苷酸酶，是一种相对分子量为70kb的多功能跨膜糖蛋白，通过GPI（糖基磷脂肌醇）锚定于细胞膜表面。CD73的酶活性就是将一磷酸腺苷水解为腺苷，是产生腺苷的关键酶分子。CD73催化生成的腺苷，作为一种内源性嘌呤核苷，在生理和病理条件下都具有重要作用，同时也是胞内寄生的原虫主要的嘌呤来源。CD73既有细胞外水解酶的活性又具有非水解酶的功能。CD73还具有调节癌细胞的浸润和转移的功能，使得其成为细胞和层黏蛋白、纤维蛋白等细胞外基质成分间的粘附分子信号通路。体外实验证明：CD73在多重耐药性的乳腺癌细胞中表达上调，并可促进人乳腺癌细胞的侵袭、迁移和黏附，可以明显的发现恶性程度高的乳腺癌细胞中CD73的表达高于恶性程度低的乳腺癌细胞。因此，通过抑制CD73基因的表达能够在一定程度上达到控制肿瘤的目的。通过调节多种肿瘤微环境中的细胞为肿瘤的生长创造了免疫抑制的空间，靶向CD73为治疗肿瘤提供新的可能性。
通过pET28a（ ）-CD73的构建，在大肠杆菌中大量表达CD73，成本较低，是作为抗原制备抗体的最佳选择。
实验流程：
1.引物设计
在NCBI上搜索人的CD73基因,再找到该基因的mRNA,并确定CD73基因的开放阅读框所在位置。通过其mRNA以及引物设计的原则，用Primer Premier 5软件设计出14-17bp左右的上下引物。最后，将所需基因序列和设计完成的上下引物外包公司制备。
2.聚合酶链式反应（PCR）
在25mu;l体积中加入Easy pfu酶，模板，纯化水，上下引物。在合适的条件（95℃，5:00；95℃，0：30；55℃，0:30；72℃，1:30）下进行循环30次体外扩增CD73基因，最后在72℃，10:00结束PCR。
3.PCR产物的回收
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