CAGCre转基因小鼠的基因型鉴定文献综述

 2022-07-23 03:07

CAGCre转基因小鼠的基因型鉴定研究综述

摘要:CAGCre转基因小鼠与杂合子小鼠杂交,筛选后代小鼠得到目的基因敲出的小鼠。利用这种方法可以在小鼠特定组织和特定发育时间通过CAG基因的时空表达控制Cre基因的表达,从而调控Cre-LoxP重组酶系统对靶基因的切除、转入、重组。目前已有很多Cre转基因小鼠构建成功的案例,为CAGCre转基因小鼠的建立提供了技术支持和可能性。本研究是对转基因操作后的小鼠进行PCR鉴定筛选,根据条带结果得到目的CAGCre转基因小鼠,为后续实验提供Cre工具鼠,可用于疾病相关基因研究、疾病模型建立、转基因动物培育等试验研究。

关键词:cre; 小鼠; CAG;基因型鉴定

一、引言

CAGCre小鼠的建立实现了CAG和Cre基因表达的相关性,即CAG的表达决定了Cre酶的表达,而CAG基因是哺乳动物全身性表达基因,通过CAG基因的调控,可以在特定发育时期和身体组织表达Cre重组酶。用于Cre-LoxP重组酶系统对目的基因的切除、转入、重组时,通过CAG基因的表达调控,在特定时间、空间实现靶基因的条件性基因敲除。在进行基因敲除之前,需要准备Cre转基因鼠和LoxP鼠,转基因后的小鼠需要进行筛选得到Cre转基因鼠,为之后的实验提供实验材料。经查阅资料,Cre转基因小鼠的额构建筛选已有较多成功前例,此研究主要对由其他实验室转基因操作后的小鼠进行基因筛选,分选出CAGCre转基因小鼠。

二、Cre-LoxP系统基因敲除和PCR原理及CAG基因概述

  1. Cre-LoxP系统原理

Cre-LoxP重组酶系统是一种位点特异性的基因重组技术,广泛应用于DNA链和染色体特异位点的基因敲除、基因插入、基因翻转和基因易位,在真核生物和原核生物中均有广泛应用。

Cre重组酶是大肠杆菌噬菌体P1中cre基因编码表达的由343个氨基酸组成的相对分子质量38000的蛋白质[1]。它不仅具有催化活性,而且与限制酶相似,能识别特异的 DNA 序列,即 LoxP 位点,使两个LoxP位点间的基因序列被删除或重组。Cre重组酶有70%的重组效率,不借助任何辅助因子,可作用于多种结构的 DNA 底物,如线形、环状甚至超螺旋 DNA。

LoxP位点长为34bp,包括两个13bp的反向重复序列和一个8bp的间隔区域。其中,反向重复序列是Cre重组酶的特异识别位点,间隔区域决定了LoxP位点的方向。

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