高产蛋白酶菌株的分离纯化、初步鉴定及发酵条件优化文献综述

 2023-02-06 12:02

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)一.课题简介蛋白酶是催化肽键将蛋白质水解生成小分子肽和氨基酸的酶,广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中,是研究、应用比较深入的一类酶。

微生物发酵法是生产蛋白酶最主要的方法,从菌种类型上分类,微生物蛋白酶主要由霉菌和细菌生产。

微生物具有资源广泛、生长代谢快、易于培养、繁殖和分离纯化工艺简单等优点,所以通过微生物发酵产蛋白酶的研究成为蛋白酶研究领域的热点,而高产蛋白酶菌株的获得是这个问题的重中之重蛋白酶目前是世界上生产与使用最广泛的商业酶,微生物蛋白酶提取有不可比拟的提取条件,而后期的更容易获得高产蛋白酶的优秀菌株,而我们国家对蛋白酶的研究开发依然不足,蛋白酶种类少,酶制剂比较单一。

本课题将分几个步骤从几个方面系统研究蛋白酶的内容:由土壤中筛选出高产蛋白酶菌株,菌株的形态学鉴定,以确定菌株的属性;研究菌株的发酵最优条件,优化培养条件,从而进一步提高菌株的产酶活力。

二.文献综述 1.材料与试剂1.1材料 土壤样品:取自南京市不同区域的土壤样品。

培养基:细菌种子斜面培养基: 细菌筛选培养基: 细菌基础液体培养基: 主要试剂:脱脂奶粉,氯化钠(NaCl),蔗糖,碳酸钠,酪氨酸,琼脂粉,营养肉汤培养基粉,三氯乙酸,结晶紫,干酪素,磷酸氢二钠,磷酸二氢钠,孔雀绿染料,美兰染液等1.2实验仪器: 电热压力蒸汽灭菌锅、全温振荡培养箱、化培养箱、超净工作台、电子分析天平、离心机、pH测量仪、紫外分光光度计、水浴锅、微波炉、光学显微镜 2.1基本实验方法2.1.1筛选方法 将划线分离纯化的菌株以点种的形式接种于筛选用培养基(脱脂牛奶琼脂培养基)平板上,如果点种的菌株能够产生碱性蛋白酶,则在平板上会产生水解圈。

通过测定水解圈直径(力和菌落直径(D)的大小,并求得其比值,即可确定该菌株产酶能力的相对大小。

挑选出水解脱脂牛奶能力较强的菌株,并将其保存在牛肉膏蛋白胨试管斜面上。

2.1.2 酶活力测定用Folin一酚法测定酶活力,将测定样品与底物酪蛋白混合一定时间,根据产生的酪氨酸的量求出碱性蛋白酶活力的大小。

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