利用非特异性核酸内切酶提高外源基因的整合效率一、课题的研究背景、意义和目的基因工程药物的开发与应用蕴藏着巨大的社会价值及商业价值。
以哺乳动物细胞为基础的真核表达系统有着与人类细胞几乎相同的翻译后修饰功能，是基因工程蛋白质药物理想的表达平台。
众多的真核表达细胞中，CHO（中国仓鼠卵巢细胞）是目前产业化程度最高的细胞之一。
其效能和安全性得到了广泛的认可，优良的悬浮培养特性可适应大规模生物反应器的应用，具有良好的产业化前景。
CHO 细胞属于成纤维细胞( fibroblast) , 很少分泌自身的内源蛋白, 利于外源蛋白的后分离。
但CHO 细胞培养成本高, 条件难掌握, 易污染, 在一定程度上影响了它的广泛应用。
目前已有越来越多的药用蛋白在CHO 细胞中获得了高效表达, 其中部分药物已投放市场, 例如EPO、GCSF等。
目前随机整合仍在使用，而在此基础上建立的传统加压筛选方案无法满足产业化对高表达细胞株的需求。
它的原理是利用含编码二氢叶酸还原酶（DHFR）序列的外源目的基因片段转染DHFR缺陷型CHO细胞，在DHFR抑制剂氨甲蝶呤（MTX）浓度逐级提高的选择性压力下，携带DHFR序列的外源基因片段拷贝数不断扩增，并随机整合宿主染色体，从而得到高表达水平的细胞株。
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