开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、选题背景及意义
白血病是一类造血细胞恶性增殖的克隆性疾病,包括淋巴系白血病和髓系白血病两大类。由于造血干细胞的存在和不良药物依从性,部分患者对白血病治疗药物产生耐药性,治疗效果差,因此深入白血病致病机制研究开发新的治疗靶点迫在眉睫。微小RNA(micro RNA,miRNA)是一类长度约22个核苷酸的高度保守非编码RNA,广泛参与细胞的凋亡、增殖、分化、代谢等过程。它与靶基因3rsquo;端非翻译区完全或不完全结合,能够抑制靶基因翻译或使靶基因降解,对动植物的发育起着重要调节作用。近年来,有大量研究表明,miRNA的表达与包括白血病与肿瘤在内的各种疾病的发展有关。
miR-142基因位于17q22号染色体,其倾向于在成熟造血细胞中高水平表达。miR-142首先被发现与t(8;17)易位的侵袭性B细胞白血病有关,且在T淋巴细胞的发育过程中起重要作用。此外,有研究表明miR-142在淋巴细胞白血病和髓系白血病细胞中均有表达。本文将初步探讨miR-142潜在调控靶点及其对白血病细胞的影响,力争为白血病的治疗提供新靶点。
二、拟研究内容及待解决的问题
探究miR-142在白血病细胞中的表达情况及其调控靶点。检测白血病细胞株(K562、KU812)与PBMC中miR-142的表达,通过targetscan等数据库预测miR-142下游靶点并进行验证,进一步研究其对慢粒细胞的影响。
三、研究手段
利用细胞与分子生物学的常用技术与分析方法,通过载体构建、琼脂糖凝胶电泳、PCR、双荧光素酶报告基因检测等技术验证其潜在靶点,细胞培养、RNA提取、qRT-PCR和蛋白质印迹等研究手段分析miR-142表达含量及其对慢粒细胞的影响。
四、文献综述
造血是一个高度调控的过程,基因序列的改变、转录或翻译过程的异常可能导致白血病的发生[1]。白血病是一组造血细胞恶性增生的克隆性疾病,60%~80%患者经联合治疗能获得完全缓解,但大多数患者终因复发而不治。目前认为患者体内存在的极少数具有自我更新和增殖能力的白血病干细胞是白血病耐药和复发的主要根源,因此只有清除白血病干细胞才有可能根治白血病[2]。
